目的基因的检测与鉴定

(1)界定“标记基因”与“DNA分子杂交技术”在目的基因检测中的作用：

①载体上标记基因的标记原理

载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应抗生素，所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞，倘若在选择培养基中不能存活，则表明无质粒转入，当然不会有“目的基因”转入，能存活时必含目的基因，原理如下图所示：

②“标记基因”筛选后为何还需应用“DNA分子杂交技术”确认目的基因是否转入？

经上述步骤筛选得到的受体细胞，只是含特定(具有标记基因)的质粒，然而，该质粒上是否成功嵌入了目的基因，还不能确定，故仍需使用“目的基因”作探针，利用DNA分子杂交技术，检测受体细胞的质粒上是否含目的基因。

(2)使用“目的基因”作探针，运用“分子杂交技术”检测目的基因是否转录出特定mRNA。

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(3)采用“抗原—抗体杂交技术”，从转基因生物中提取蛋白质(作抗原)与相应抗体杂交，依据是否出现杂交带确认目的基因是否“指导”特定蛋白质的合成。

(4)采用抗虫、抗病毒等“接种实验”进行目的基因成功表达的“个体生物学”水平的检测。

1.如图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的是( )。

A.HindⅢ

B.EcoR Ⅰ

C.Eco B D.Pst Ⅰ

解析 A处有BamH Ⅰ、Eco B、Cla Ⅰ限制酶的切点，使用A～D中的Eco B切割时，才能让目的基因插入到A处。

答案 C

2.为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将从陆地棉基因库中获取的酶D基因与位

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于拟南芥叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得转基因油菜品种。酶D基因、转运肽基因所含三种限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ)的切点如图所示。请回答下列问题：

(1)用限制酶________和________酶处理两个基因后，可得到A、D端相连的目的基因。

(2)将上述目的基因插入如图所示质粒的________中，构建________，然后将其导入农杆菌中。

(3)利用________法将目的基因导入油菜叶片中，并通过筛选获得转基因油菜细胞，通过________技术可培育成转基因油菜植株。

(4)用________技术可检测转基因油菜的染色体DNA上是否插入了目的基因，用________技术可检测转基因油菜植株中的目的基因是否翻译成蛋白质。

答案 (1)ClaⅠ DNA连接 (2)T－DNA 基因表达载体 (3)农杆菌转化 植物组织培养 (4)DNA分子杂交 抗原—抗体杂交

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