试剂：（每1土壤样品所需用量）
1甲醇:氯仿:磷酸缓冲液=2:1:0.8 （1×30ml）
2磷酸缓冲液 = 磷酸二氢钾:磷酸氢二钾:蒸馏水=1.36g:1.74g:400ml, 用NaOH 调pH7.4 ,提取液配置时先加磷酸缓冲液和甲醇，再加氯仿 3氯仿(1×2.5ml+10ml) 4无菌水(1×2.5ml)
5硅酸 (100-200 mesh, 1×0.5g)
6丙酮（1×10ml） 7甲醇（1×6ml）
8 100μl-50mg/l的内标样十九烷酸nonadecanoic acid (19:0) 9试剂1 （NaOH:甲醇:蒸馏水=45g:150ml:150ml）（1×1ml） 10试剂2 （6N HCl:甲醇=325ml:275ml）（1×2ml） 11试剂3（ 正己烷:甲基叔丁醚=200ml:200ml）（1×9ml） 12试剂4 1.2% (w/v) NaOH （1×3ml） 仪器和耗材： 1离心管 2 漩涡振荡 3 复式振荡机 4离心机 5收集管
6玻璃移液管（15、
10、5、1、0.1ml） 7冰箱 8 电热干浴 9 硅酸柱 10 玻璃棉 11铝箔
12通风柜 13真空干燥器 14 PLFA接受试管 15 氮气和氮吹仪 16 水浴锅 17 滴管
18 GC小瓶 19 试管架 20棕色玻璃试剂瓶
提取步骤：
1. 称取2g冷冻干燥后土样于离心管中（可称2~5克，有机质含量越高，称取质量越少）。 2.加入15ml提取液（甲醇:氯仿:磷酸缓冲液=2:1:0.8，磷酸缓冲液 =KH2PO4: K2HPO4:蒸馏水=1.36g:1.74g:400ml, 用NaOH 调pH7.4 ,提取液配置时先加磷酸缓冲液和甲醇，再加氯仿），漩涡振荡1min，然后室温下往复式振荡16h（室温下水平振荡），静止10min。 3.室温下1000—1500rpm离心10mins，上清液用移液管转入收集管中。
4.再加15ml提取液于离心管中，漩涡震荡1min，然后往复式振荡2h，静止10min。
5.室温下同样速度再离心10min，上清液转移到收集管中，两次合并。
6.将此收集管中加入2.5ml氯仿和2.5ml无菌水，振荡1min，放入4℃冷藏冰箱静止过夜，将下层转入另一收集管中，在40℃电热干浴用氮气吹干，用1ml 氯仿溶出，在-20℃冰箱里保存。
7.硅酸柱编号（一般是无法编号的，因为有机溶剂会将它们洗去。一般用有编号的样品试管一一对应）。
8.柱子下颈部塞入适量玻璃棉，加入适量（0.5克左右5-8cm高）硅酸 (Silicic acid, 100-200 mesh) ，硅酸柱直立浸入氯仿中，氯仿高度与硅酸高度相平，用铝箔覆盖，在通风柜中过夜。然后，放在真空干燥器中抽真空赶气泡（约3-5分钟），使柱体保持氯仿浸润。 9.在柱顶逐渐加入氯仿提取样品，保持柱子硅酸表面湿润 (不能发白) ，样品加完后，用少量氯仿洗样品试管三次，然后用5ml氯仿淋洗柱子；
10.再用10ml丙酮淋洗柱子，洗完后让丙酮液滴滴尽，将PLFA接受试管 (编号)接在柱子下，用5ml甲醇洗脱PLFA；
11. 在甲醇洗脱液中加入100μl-50mg/l的内标样十九烷酸（19:0），在40℃电热干浴用氮气吹干，用1ml甲醇溶出； 12.皂化：
加入1ml试剂1 （NaOH:甲醇:蒸馏水=45g:150ml:150ml），拧紧盖子，涡旋振荡5-10s，松开盖子一圈，置沸水浴5min，然后拧紧盖子，涡旋振荡5-10s后再置于沸水浴中25min，取出后用冰浴退火； 13.甲基化：
加入2ml试剂2 （6N HCl:甲醇=325ml:275ml），盖紧盖子，涡旋振荡，于80˚C±1˚C加热保温10min±1min，取出后用冰浴？退火； 14.萃取：
加入3ml试剂3（ 正己烷:甲基叔丁醚=200ml:200ml），振荡以提取PLFA甲酯，用滴管吸取上层正己烷相于另一干净试管，注意不要吸入杂质层和下层水相。 15.洗涤：
加3.0ml试剂4，上下摇动5分钟，吸取三分之二上层溶液,转入气相色谱瓶(GC瓶，约1ml) ，拧紧盖子，冷冻储存。如需浓缩，用氮吹在40℃电热干浴下浓缩至干，然后用200μl试剂3将甲基脂肪酸酯溶出，转移入内插管中。
注意：提取过程中所用器皿不能接触塑料，玻璃器皿需要严格清洗，防止脂肪酸污染。
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