中国中西医结合肾病杂志２０１６年１１月第１７卷第１１期ＣＪＩＴＷＮ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１６，Ｖｏ１．１７，Ｎｏ．１１ ・９５９・ 肾炎消白颗粒对糖尿病肾脏病大鼠 肾组织ＶＥＧＦ及ＩＧＦ表达的影响 于 梅① 姜国华② ［摘包海鹏① 迟继铭① 王 悦① 黄凤林① 董云英① 刘庆燕① 冯晓轩① 要］ 目的：通过实验观察肾炎消白颗粒对糖尿病肾脏病（ＤＫＤ）模型大鼠血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）及胰岛素样 生长因子（ＩＧＦ）表达的影响，探讨肾炎消白颗粒防治ＤＫＤ的机制。方法：采用高糖、高脂饮食联合单侧肾切除加一次性腹腔 注射链脲佐菌素（ＳＴＺ）方法建立ＤＫＤ大鼠模型…，将大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、盐酸贝那普利（洛汀新）组、肾 炎消白颗粒高剂量组、肾炎消白颗粒低剂量组共５组。连续灌胃８周，检测大鼠尿微量白蛋白（ｍＡｌｂ）；采用免疫组化法检测 大鼠肾组织ＶＥＧＦ及ＩＧＦ的表达。结果：肾炎消白颗粒能明显降低尿ｍＡｌｂ，与模型组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），并 以低剂量组更为明显，低剂量组与洛汀新组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；与空白组相比，模型组大鼠肾组织ＶＥＧＦ与 ＩＧＦ表达水平显著升高（Ｐ＜０．０５）；经肾炎消白颗粒治疗后，与模型对照组比较，大鼠肾组织ＶＥＧＦ与ＩＧＦ表达水平显著下降 （Ｐ＜０．０５）。结论：ＶＥＧＦ与ＩＧＦ参与糖尿病肾脏损害的发生，肾炎消白颗粒可能通过下调ＶＥＧＦ与ＩＧＦ的表达，降低尿蛋白 的排出，达到保护肾脏的目的，延缓模型大鼠糖尿病肾脏病进展。 ［关键词］ 糖尿病肾脏病 肾炎消白颗粒ＶＥＧＦ ＩＧＦ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ Ｘｉａｏｂａｉｋｅｌｉ ｏｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ ａｎｄ ＩＧＦ ｉｎ Ｒａｔ ｗｉｔｈ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅ ｙ（，Ｍｅｉ，ＪＩＡＮＧ Ｇｕｏｈｕａ，ＢＡＯ Ｈａｉｐｅｎｇ，ｅｔ ａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ，Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｆＨｅｉｏｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｈａｒｂｉｎ（１５０００１） ＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ Ｘｉａｏｂａｉｋｅｌｉ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃ— ｔｏｒ ａｎｄ Ｉｎｓｕｌｉｎ—ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ（ＤＫＤ），ａｎｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ Ｘｉ— ａｏｂａｉｋｅｌｉ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＤＫＤ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａｆｔｅｒ Ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｒａｔｓ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓ— ｅａｓｅ ｗｉｔｈ Ｈｉｇｈ Ｆａｔ／Ｈｉｇｈ Ｓｕｃｒｏｓｅ Ｄｉｅｔ ａｎｄ Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ，ｔｈｅｙ ａｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｉｎｔｏ ５ ｇｒｏｕｐｓ：ｔｈｅ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ Ｘｉａｏｂａｉｋｅｌｉ，ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ Ｘｉａｏｂａｉｋｅｌｉ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ Ｂｅｎａｚｅｐｒｉｌ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（Ｌｏｔｅｎｓｉｎ）．Ａｔ ｔｈｅ ８ｔｈ ｗｅｅｋ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｔｅｓｔ ｔｈｅ Ｕｒｉｎａｒｙ ｍｉｃｒｏａｌｂｕｍｉｎ （ｍＡｌｂ）；ｔｅｓｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＶＥＧＦ ａｎｄ ＩＧＦ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ Ｘｉａｏｂａｉｋｅｌｉ ｃａｎ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｍＡｌｂ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｔｈｅ ｒｏｕｐ ｇｗｉｔｈ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ Ｘｉａｏｂａｉｋｅｌｉ ｉｓ ｍｕｃｈ ｃｌｅａｒｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｒｏｕｐ（Ｐ＜０．ｇ０５），ａｎｄ ｔｈｅ ｌｏｗ ｄｏｓｅ ｒｏｕｐ ｇｗａｓ ｍｏｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓ，ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｌｏｔｅｎｓｉｎ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｌｏｗ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ ｈａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）；Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｂｌａｎｋ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＶＥＧＦ ａｎｄ ＩＧＦ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）；Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ Ｘｉａｏｂａｉｋｅｌｉ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＶＥＧＦ ａｎｄ ＩＧＦ ｉｎ ｋｉｄｎｅｙ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｒａｔｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＶＥＧＦ ａｎｄ ＩＧＦ ｗａｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓ— ｅａｓｅ．Ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ Ｘｉａｏｂａｉｋｅｌｉ ｍａｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ ａｎｄ ＩＧＦ，ｒｅｄｕｃｅ ｕｒｉｎａｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ，ｓｏ ａｓ ｔｏ ａｃｈｉｅｖｅ ｔｈｅ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｋｉｄｎｅｙ，ｄｅｌａｙ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ． ＫＥＹ ＷＯｌＩＤＳ Ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ Ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ Ｘｉａｏｂａｉｋｅｌｉ ＶＥＧＦ ＩＧＦ 糖尿病肾脏病（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ，ＤＫＤ）为糖 展，开始显现临床蛋白尿，蛋白尿从间歇性逐渐发展 进而肾小球出现硬化，最后发展为慢性肾 尿病的主要微血管病变 ，早期糖尿病肾脏病无临 为持续性，床蛋白尿，只能检测出微量蛋白尿。随着病情不断进 衰竭，已成为终末期肾衰竭（ＥＳＲＤ）的主要原因之 ！ 本课题为黑龙江省自然科学基金资助项目（Ｎｏ．Ｈ２０１３１０８）；黑龙江中医药大学创新体系重点实验室建设项目 ①黑龙江省中医药科学院肾七科（哈尔滨１５０００１） ②黑龙江中医药大学解剖教研室（哈尔滨１５００３６） ・９６０・ 【３ Ｊ医结合肾病杂志２０１６年１１月第１７卷第１１期ＣＪＩＴ ！ ： ０】：！！ ． 一也是ＤＭ的主要死亡原因之一。近年的研究表 炎消白颗粒低剂量组（低剂量组，１．８ ｇ・ｋｇ一 ・ｄ ）， 模型对照组给予等量的蒸馏水灌胃；给药时问 明细胞因子在ＤＫＤ的进展中发挥关键的作用，主要 空白、， 包含转化生长因子一ｐ（ＴＧＦ—ｐ）、结缔组织生长因子 ８周。４取材造模成功后２、４、６、８周末用代谢笼收 （ＣＴＧＦ）、血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、胰岛素样生长 ／ｍｉｎ、１５ ｍｉｎ， 因子（ＩＧＦ）、肝细胞生长因子（ＨＧＦ）、表皮生长因子 集２４ ｈ尿，计尿液总量后离心（３ ５００ ｒ（ＥＧＦ）以及血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）等，其中尤 取上清液，置一７０ 冰箱保存）。在８周末用１０％的 肾并用 以ＶＥＧＦ及ＩＧＦ在肾脏表达的增高意义显著 。肾 水合氯醛溶液麻醉下剖腹、结扎右侧肾脏，取。将右侧肾脏组织放人１０％中 炎消白颗粒是国医大师张琪教授多年临床治疗各种 ＰＢＳ液灌洗肾脏至发白， 蛋白尿的疗效显著方剂。本实验通过观察肾炎消白 性缓冲液甲醛中固定，以备免疫组化检测。颗粒对ＤＫＤ大鼠肾组织中ＶＥＧＦ及ＩＣＦ表达的影响， 从细胞因子的角度揭示肾炎消白颗粒在治疗糖尿病 肾脏病中的作用机制。 材料与方法 １动物ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｇ）雄性大鼠６０只， 鼠龄６周，体重１８０～２００ ｇ，购自青岛市动物实验中 心，微生物级别：清洁级；许可证号：ＳＣＸＫ（鲁） ２０１４０００１。大鼠适应性喂养５ ｄ，查血糖正常、尿蛋白 定性试验阴性、动物健康状况良好，开始实验。 ２药物与试剂 肾炎消白颗粒（黄芪、土茯苓、 党参、山药、薏苡仁、女贞子、菟丝子、熟地黄、枸杞子、 白茅根、益母草、芡实）：规格１０ ｇ／袋，由黑龙江省中 医药科学院药局提供，批号：黑药制字Ｚ２００９００１ １；盐 酸贝那普利（洛汀新）：规格１０ ｍｇ／片，北京诺华制药 有限公司，批号：国药准字Ｈ２００３０５１４。链脲佐菌素 （ｓｔｒｅｐｔｏｗｔｏｃｏｍ，ＳＴＺ）：规格１００ ｍｇ／支，美国Ｓｉｇｍａ公 司，批号ＳＯ１３０。枸橼酸缓冲液：枸橼酸及枸橼酸钠， 使用前１天配成０．１ ｍｏＬ／Ｌ，ｐＨ４．４的缓冲液，嚣于 ４ 冰箱冷藏，备用。 ３分组及造模动物购入后，适应性喂养５ ｄ， 查血糖正常、尿蛋白定性试验阴性、动物健康状况良 好，开始实验。按体重随机分为两组，即空白对照组 （空白组）８只，ＤＫＤ模型制作组５２只。实验开始各 组ＤＫＤ大鼠予高糖、高脂饮食，而空白组则自由摄食 普通饲料，两组均自由饮水。８周后ＤＫＤ组大鼠禁食 １２ ｈ后，腹腔注射１０％水合氯醛溶液０．３５ ｍｌ／１００ ｇ， 进行麻醉。确认麻醉后，行左侧肾脏切除术。手术后 ２周，各组大鼠禁食１８ ｈ后，按５０ ｍｇ／ｋｇ予ＳＴＺ一次 性腹腔注射２．５ ｍｌ／ｋｇ（临用前用０．１ ｍｏｌ／Ｉ 、ｐＨ４．４ 的枸橼酸缓冲液溶解，浓度２％），空白对照组注入等 量的枸橼酸缓冲液。注射ＳＴＺ ７２ ｈ后，尾静脉采血测 血糖，并留２４ ｈ尿。以血糖水平≥１６．７ ｍｍｏｌ／Ｌ、尿糖 呈阳性、并稳定５ ｄ且２周后测尿蛋白阳性，作为ＤＫＤ 动物模型建立标准列人观察对象。 将造模成功的大鼠随机分为模型对照组和盐酸 贝那普利组（洛汀新组，０．９０ ｍｇ・ｋｇ ・ｄ ）、肾炎 消白颗粒高剂量组（高剂量组，３．６ ｇ・ｋｇ～・ｄ ）、肾 ５观测指标 ５．１ 检测尿微量白蛋白 将预先收集储存好的 尿液按白蛋白测定试剂盒方法（散射比浊法）检测尿 微量白蛋白。 ５．２免疫组化法观察大鼠肾组织中ＶＥＧＦ、ＩＧＦ 蛋白表达情况将５ ｍ厚的肾组织石蜡切片常规脱 蜡入水，柠檬酸缓冲液（ｐＨ６．０）修复、３％Ｈ Ｏ。、５％ ＢＳＡ封闭后一抗（兔抗鼠多克隆抗体，美国Ｓｉｇｍａ公 司），４ ｃｃ过夜后，分别加入二＿二抗ＩｇＧ及ｓＰ复合物， ＤＡＢ显色，苏木素复染，脱水、透明、封片后镜检并以 积分光密度（ＩＯＤ）代表蛋白相对表达量，积分光密度 （ＩＯＤ）：阳性面积Ｘ平均光密度，每张切片随机分析 ５个高倍镜视野，取其均值代表ＶＥＧＦ和ＩＧＦ的表达 强度值。 ６统计‘学方法数据资料以（ ±Ｓ）表示，采用 ＳＰＳＳ １７．０统计软件分析，组间比较采用单因素方差 分析，两两比较用ＳＮＫ检验法，Ｐ＜０．０５为差异有统 计学意义。 结 果 １ 尿微量白蛋白（ｍＡｌｂ）变化见表１，图１。 表１ 不同时问各组大鼠ｍＡｌｂ的比较（叠±Ｓ，ａｒｇ／２４ ｈ） 组别 ｎ ２剧４周 ６周８ Ｊ 互！自组８ ０．６０±０．０８ ０ ５８±０．０５ ０．５６±０．０９ ０．５３±０．１０ 模型组 ６ ３．１５±０．８２ ５．４２±０．９２ ６ ８０±０．８２ ８ ９４±１．００ 洛汀新组８ ２．９２±０．７１ ４．９８±０．８６ ５．７３±０．５３ ６．５５±Ｊ．２５ 高剂量组６ ２．８５±０．８０ ５．０７±０．９０ ５．３５±０．４６ ６．４７±１．０３ 低剂量组９ ２．６１±１．１４ ４．４６±０．９８ ４．５２±０ ５７ ５ ３９±２．９２ 注：与空ｒｊ组比较， Ｐ＜０．０５；与模型组比较， Ｐ＜０．０５；与洛汀新 组比较， Ｐ＜０．０５ ２周 ４周 ６周８周 图１不同时 各组大鼠ｍＡｌｂ的比较 中国中西医结合肾病杂志２０１６年ｌ１月第１７卷第ｌ】期ＣＪＩＴＷＮ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１６．Ｖｏｌ＿ｌ７．Ｎ０．１１ ４ ４ ３ ３ ２ ２ ｌ ｌ ・９６１・ 见表２，图２。 终可诱导系膜细胞的增生，促进系膜对葡萄糖的转运 姗 吸收，增加肾小球滤过率 Ｊ，引起ｍＡｌ咖 ０ ＶＥＧＦ呈现棕黄色即阳性表达于各组肾小球脏层上皮 ｂ的排泄增加， 细胞、系膜区、基底膜以及肾小管上皮细胞（见图３）。 推进ＤＫＤ的进展。 ２ ＶＥＧＦ蛋白免疫组化表达情况３ ＩＧＦ蛋白免疫组化表达情况 见表２，图２。 本实验研究表明，肾炎消白颗粒能明显降低尿 ＩＧＦ在各组肾小球、肾小管脏层上皮细胞及基底膜、系 ｍＡｌｂ，与模型组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）； 膜区均有棕褐色阳性表达（见图４）。 表２各组大鼠肾脏ＶＥＧＦ、ＩＧＦ表达的比较（ ± ） 注：与空白组比较， Ｐ＜０．０５；与模型组比较， Ｐ＜０．０５ 图２各组大鼠肾组织ＶＥＧＦ、ＩＧＦ表达的比较 讨 论 国医大师张琪教授指出ＤＫＤ的病机主要为脾肾 两虚，湿浊兼夹瘀血。脾肾两伤，气阴两虚是ＤＫＤ蛋 白尿产生之本；湿浊内蕴，兼夹瘀血是ＤＫＤ蛋白尿产 生之标。本病属于本虚标实之证，因此治疗此疾病时 应当标本兼顾，补泻兼施。肾炎消白颗粒的主要功效 为益气补肾、清热利湿，佐以活血 。本方黄芪、党参 主益气为君药；辅以山药健脾益气，熟地黄，枸杞子、 女贞子、菟丝予滋补肾阴，共为臣药；土茯苓、薏苡仁 淡渗利湿，白茅根清热利湿为佐；益母草主活血祛湿， 芡实主固精收涩为使药。此方可提升免疫、抗凝、修 复受损细胞，减少尿蛋白的排出。 微量白蛋白尿反应肾脏异常渗漏蛋白质，是糖尿 病肾脏病早期肾脏受损的敏感可靠表征 ，是临床诊 断可靠的指标。 血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃ－ ｔｏｒ，ＶＥＧＦ）最初是作为一种肿瘤渗透因子在１９８９年发 现，在肾脏，ＶＥＧＦ的异常表达介导了血栓性微血管疾 病、糖尿病肾脏病和原发性肾小球疾病等多种肾脏 病 Ｊ。ＶＥＧＦ的异常升高特异性的作用于肾组织血管 内皮，增加了血管的通透性，致使滤过屏障的完整性 受损，促进ｍＡｌｂ的漏出。胰岛素样生长因子（ｉｎｓｕｌｉｎ —ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ，ＩＧＦ）通过与肾素一血管紧张素系 统联合的作用影响肾血流动力学，其活性在糖尿病肾 脏病及多囊肾中均有表达增强Ｌ ｓ ３。ＩＧＦ的表达增强最 与洛汀新组比较，低剂量组降低尿ｍＡｌｂ更加明显 （Ｐ＜０．０５）；与空白组比较，模型组ＶＥＧＦ及ＩＧＦ蛋白 的表达显著升高（Ｐ＜０．０５）；实验中各治疗组与模型 组对照比较，ＶＥＧＦ及ＩＧＦ蛋白的表达均有所下降 （Ｐ＜０．０５）。提示肾炎消白颗粒能通过下调ＶＥＧＦ及 ＩＧＦ蛋白的表达，减少蛋白尿漏出、延缓模型大鼠糖尿 病肾脏病的病程进展，且低剂量的肾炎消白颗粒即临 床等效组疗效更显著。 本研究的创新处在于将国医大师张琪教授治疗 原发性肾小球肾炎的有效方剂运用于糖尿病肾脏病 的研究中¨ ，研究方法成熟、可靠¨ 。 （本文图３、图４见插页１—２） 参考文献 １．李志杰，张悦．糖尿病肾病动物模型的研究进展．生命科学， ２０１１，２３（１）：９０—９５． ２．Ａｓｈｏｆｆ Ａ，Ｑａｄｒｉ Ｆ，Ｅｇｇｅｒｓ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｓ Ｃａｐｉｌ— ｌａｒｙ Ｒａｒｅｆａｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ—Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒａｔｓ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ Ｇｌｕｃｏｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｅｘ ｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１２，４９（３）：２６０—２６６． ３．Ｇｏｌｅｇ ＦＡ，Ｋｏｎｇ Ｎ，Ｓａｈａｔｈｅｖａｎ Ｒ．Ｄｉａｌｙｓｉｓ—ｔｒｅａｔｅｄ ｅｎｄ—ｓｔａｇｅ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ Ｌｉｂｙａ：ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ．Ｉｎｔｅｒｎａ— ｔｉｏｎａｌ Ｕｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，２０１４，４６（８）：１５８１—１５８７． ４．庾更绪，尹晓锴．津力达颗粒治疗糖尿病肾病及对血清 ＶＥＧＦ和ＩＧＦ的影响．中国中医药现代远程教育，２０１６，１４ （１）：５５—５６． ５．于梅．肾炎消白颗粒对早期糖尿病肾病大鼠蛋白尿及足细胞 相关因子的影响．哈尔滨：黑龙江中医药大学，２０１２．１—１０９． ６．Ｃｈｏｕ ＣＫ，Ｌｅｅ ＹＴ，Ｃｈｅｎ ＳＭ，ｅｔ ａ１．Ｅｌｅｖａｔｅｄ ｕｒｉｎａｒｙ ｄ—ｌａｃｔａｔｅ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｄｉａｂｅｔｅｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏａｌｂｕｍｉｎｕｒｉａ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ，２０１５，１１６（１０）：６５—７０． ７．Ｓｉｓｏｎ Ｋ，Ｅｒｅｍｉｎａ Ｖ，Ｂａｅｌｄｅ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｒｅｑｕｉｒｅ Ｐａｒａｃｒｉｎｅ，Ｎｏｔ Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ，ＶＥＧＦ—ＶＥＧＦＲ一 ２ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ，２０１０，２１（１０）：１６９１—１７０１． ８．Ｂａｃｈ ＬＡ．Ｈａｌｅ Ｕ．Ｉｎｓｕｌｉｎ—ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ— ｅａｓｅ．Ａｍ Ｊ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ，２０１４，６５（２）：３２７—３３６． ９．韩利梅，方敬爱，孙艳艳，等．芡实对糖尿病。肾病大鼠肾组织 中ＳＯＣＳ一３及ＩＧＦ一１表达的影响．中国中西医结合肾病杂 志，２０１４，１５（９）：７６７—７６９． １０．黄雯静，刘娜，杨馨，等．肾炎消白颗粒对阿霉素肾病大鼠 Ｐｏｄｏｃｉｎ、０【一ａｃｔｉｎｉｎ一４蛋白的影响．中医药学报，２０１５，４３ （５）：４４—４７． １１．倪伟建，丁海华，唐丽琴，等．小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾组 织ＶＥＧＦ表达的影响．中国药理学通报，２０１５，３１（６）：７９５— ８００． （收稿：２０１６—０５—１０修回：２０１６—０７—２９） 肾炎消自颗粒对糖尿病肾脏病大鼠 肾组织ＶＥ Ｇ Ｆ及Ｉ Ｇ Ｆ表述的影响 ～一～ （见正文９５９页） 空白组 低剂量组 高剂量组 洛汀新组 模型组 图３各组大鼠肾组织ＶＥＧＦ免疫组化法的表达（ＳＰＸ４００） 空白组 低剂量组 高剂量组 洛汀新组 模型组 图４各组大鼠肾组织ｌＧＦ免疫组化法的表达（ＳＰ×４００） 慢ｌ『Ｊ兰肾脏病５期患者Ｓ Ｌ Ｃ ６ Ａ ２基因 启动子甲基丫巴状态 研究 （见正文９６６页） 盆 缸 ． 川 州 ～： ～ 一 … 臁 §ｐ ＿＿ Ｉ ¨ ’ ：０ 卜 。 ＝軎 聿＝｝ 牛字｝｝争 ｌ０ ｝二 ：Ｓ — 。｝｝ 轴 ０－矗．１ｌ，＊ ＴＴＹ（ｊ丌Ｔ＾ （・Ｖ‘；％ｍ＾＿Ｉ恤■Ⅲ ｎｈ” ＿ｄ叫 ＾Ｔ丌Ｔ＾“他丌ＴＭ‘ 勰 ■ ■ 。 ■ 一 ～ ● ■ 一一 － 嚣。 － ’ — 芋＝芊 图１ ＳＬＣ６Ａ２基因启动子区域（片段Ａ，Ｂ） 甲基化位点焦磷酸测序图 图２ ＳＬＣ６Ａ２基因启动子区域（片段Ｃ，Ｄ） 甲基化位点焦磷酸测序图 插页１—２