西部医学２０１１年９月第２３卷第９期 Ｍｅｄ Ｊ Ｗｅｓｔ ｎａ！ ！！ 笪 ！ ： ！ ：！ 国产直接胆红素系统化试剂性能评价 秦进，柳建磊 （成都大学附属医院检验科，四川成都６１００８１） 【摘要】 目的评价中生北控（Ｂｉｏｓｉｎｏ）重氮法直接胆红素系统化试剂及配套多项校准品性能。方法 两种重氮 法直接胆红素诊断试剂在ＡＵ－６４０上进行临床环境下系统比对试验，并参考ＣＬＳＩ评价程序文件ＥＰ９中的分析方法用 ＭｅｄＣａｌｅ １０．１．８．０统计软件进行线性回归与相关及偏差分析。结果 中生系统化试剂与对照试剂检测结果有较好 可比性。检测系统与对照系统的相关系数（Ｒ２＝０．９９９８和Ｒ２—０．９９９７）和相对偏倚（样品浓度Ｏ～５．１其偏倚＜士２Ｏ ， 浓度＞５．１其偏倚＜士１５ ）均可满足实验的要求。结论 中生系统血清直接胆红素检测结果与罗氏系统相比可被临 床接受，达到了开放的匹配系统实现检测结果溯源的目的。但两系统间具有一定系统负偏差，此系统偏差可能与直接 胆红素标准品的赋值有关。 【关键词】 直接胆红素；校准品；方法比对；偏差 【中图分类号】Ｒ ４４６ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７２・３５１１．２０１１．０９．０７５ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｒｅｃｔ ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ ｒｅａｇｅｎｔ ＱＩＮ Ｊｉｎ，ＬＩＵ Ｊｉａｎ－ｌｅｌ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｅｎｇｄｕ ６０００８１） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｒｅｃｔ ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ ｋｉｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ａｇｅｎｔｓ ｏｆ ｄｉａｚｏｎｉｕｍ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｉｒｅｃｔ ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ＡＵ一６４０ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ＥＰ９ ＭｅｄＣａｌｃ １０．１．８．０ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｔｗｏ ａｇｅｎｔ ｈａｄ ｃｏｍｐａｒａｂｉｌｉｔｙ．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｍ（Ｒｚ＝０．９９９８ ａｎｄ Ｒｚ一０．９９９７）．Ｔｈｅ ａｇｅｎｔｓ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｒｃｈ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｒｅｑｕｅｓｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｚｈｏｎｇｓｈｅｎｇ ｄｉｒｅｃｔ ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ ｋｉｔ ｃａｎ ｒｅｃｅｉｖｅ ｂｙ ｃｌｉｎｉｃａ１． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｄｉｒｅｃｔ ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ；Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ；Ｍｅｔｈｏｄｓ；Ｄｅｖｉａｔｉｏｎ 目前国内临床实验室直接胆红素测定方法较多， 测定试剂各种各样，项目检测系统化问题一直为国内 临床实验室及试剂厂家所重视［１］。为减少不同检测 系统对直接胆红素测定的影响，ＩＳＯ１５１８９建议实验室 采用配套试验系统（仪器、试剂、校准品、质控品等）， 以更好地对检测系统标准化，提高检测结果的可靠 性。鉴于成本及其他原因目前国内实验室采用配套 试验系统的不多，本研究以中生重氮法直接胆红素系 线性低限１．７１／￣ｍｏｌ／Ｌ及测定值大于线性高限 ３４２￣ｍｏｌ／Ｌ的样本。２＂Ｃ～８℃避光保存３天，避免反 复冻融。 １．３仪器及试剂 １．３．１仪器奥林巴斯全自动生化分析ＡＵ６４０。 １．３．２试剂 中生重氮法直接胆红素试剂、中生生 化多项工作液校准品、罗氏重氮法直接胆红素试剂及 罗氏多项校准品Ｃ．ｆａｓ。 统化试剂与奥林巴斯生化分析仪为配套研究对象，参 考ＣＬＳＩ评价程序文件ＥＰ９中的分析方法对其进行性 能评价，并与罗氏重氮法直接胆红素试剂盒在临床环 境下的检测结果进行比对，以评价中生重氮法直接胆 １．３．３校准品准备 严格按照说明书溶解校准品， 每次试验均新配置校准品。 １．４ 试验方法 严格按照仪器维护要求对仪器进行 １３维护并分别测定各自系统的质控品。在线性范围 内，选取了６１例的人血清样品，用对照系统与检测系 统同时进行测试，每个样品测定２次，取其平均值作 为最终数据。收集每天实验数据并做好备份。 １．５统计学方法１．６结果要求 １．６．１相关系数Ｒ≥０．９７５（或Ｒ２≥０．９５）。 红素系统化试剂盒能否满足临床需求，并对两套系统 偏差进行评估。 １材料与方法 １．１ 标本来源 本院常规血液标本直接胆红素值在 ≤２０ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ、２０～２００￣ｍｏｌ／Ｌ，和≥２００￣ｍｏｌ／Ｌ三个 数据统计用ＭｅｄＣａｌｃ １０．１．８．０ 统计软件进行数据处理。 范围内选定样本，样本量６１例。 １．２标本要求 避免浑浊及溶血。剔除测定值小于 西部医学２０１１年９月第２３卷第９期 Ｍｅｄ ｊ Ｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１ｌ，Ｖｏ１．２３，Ｎｏ．９ １．６．２ 相对偏差（ＢＩＡＳ ） 样品浓度为０～５． 均值Ｅ’一￣Ｅｉｊ’／１２２。允许范围是４Ｅ’。如有差值超过 ０ 毒一时 口时ｏ＝ （＿ ，１ｏ目Ｉｆ ⅡＩ晌。 １￣ｍｏｌ／Ｌ时，其相对偏倚＜士２Ｏ ，样品浓度＞５．１ 时，其相对偏倚＜±１５ 。 ２ 结果 ２．１重复性检查 两次测量偏差的相对值以ＤＸｉ’、 ＤＹｉ’得到：４ Ｄ ：Ｏ．０３０２和４ Ｄ ＝Ｏ．０３０６，参照美国 国家临床实验室标准化协会（ＮＣＣＬＳ）的ＥＰ９一Ａ２文 件［３］：所有样品测定的重复性符合相关性实验要求。 ２．２离群点检查采用以下公式Ｅｉｊ—Ｉ 一）ｄｊ Ｉ（ｉ为 样品号，１～６１；ｊ为双份测定，１或２），Ｅ＝ＺＥｉｊ／１２２。允 许范围是４Ｅ。Ｅｉｊ’－－Ｅｉｊ／）ｄｊ和Ｅｉｊ’－－Ｅｉｊ／ｙｉｊ，所有Ｅｉｊ’的 一，Ｉ，１０—嗣ＩＩ ０目一∞０ 图１ 罗氏均值对中生均值 Ｆｉｇｕｒｅ １ Ｍｅａｎ ｏｆ Ｒｏｃｈｅ ａｎｄ Ｚｈｏｎｇｓｈｅｎｇ ２５．ｏ％ §２０．０％ １５．０％ 兰ｌＯ．０％ 矍５．Ｏ％ 暑 ｏ．０％ ．５．５％ ｅ．１０．Ｏ％ §．１５．ｏ％ 疆－２０．０％ ｇ．２５．ｏ％ ∞ 图３罗氏均值对中生均值 Ｆｉｇｕｒｅ ３ Ｍｅａｎ ｏｆ Ｒｏｃｈｅ ａｎｄ Ｚｈｏｎｇｓｈｅｎｇ 由１～４图可见，检测系统与对照系统的相关系 数（Ｒ２—０．９９９８和Ｒ２—０．９９９７）和相对偏倚（样品浓 度Ｏ～５．１其偏倚＜±２０ ，浓度＞５．１其偏倚＜± １５ ）均可满足实验的要求。 ３讨论 ３．１ ＥＰ９－Ａ文件为临床实验室提供了不同试验方 法，试剂系统问的比较指南，文件要求：①操作者熟悉 仪器操作及日常仪器维护。②操作者熟悉评价方法。 允许的绝对差值范围，需要观察是否超过相对差值范 围，如果同时超过也称为离群点。ＥＰ９一Ａ允许从分析数 据中删除２．５％的点。如果有２．５％以上离群点，则需 要查找原因，重新测定样品或者增加分析样品。经检查 本次试验序号为１９的数据不能满足Ｅ ≤４ Ｅ ；序号为 ５２的数据不能满足Ｅｉｉ≤４ Ｅ 。判断为离群点剔除，剩余 的数据可以进行线性回归分析。 ２．３ 回归分析 对符合要求的数据用ＭｅｄＣａｌｃ １０．１．８．０统计软件进行分组作图，得到四组散点图， 见图１～４。 ｏ 尊一时 ——再ｏ 图２罗氏均值对中生单个值 Ｆｉｇｕｒｅ ２ Ｒｏｃｈｅ ｍｅａｎ ａｎｄ Ｚｈｏｎｇｓｈｅｎｇ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ２５．０％ ２０．ｏ％ １５．Ｏ％ 童１０．０％ 盟５．ｏ％ 暑 ｏ．ｏ％ ：．５．５％ ｅ．１０．Ｏ％ §．１５ ｏ％ 星．２０．ｏ％ §．２５．０％ ∞ 图４罗氏均值对中生单个值 Ｆｉｇｕｒｅ ４ Ｒｏｃｈｅ ｍｅａｎ ａｎｄ Ｚｈｏｎｇｓｈｅｎｇ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ③必须每天做好质控并有足够量的数据保证结果的 准确性。④操作者要有良好的职业素养能保质保量 完成实验要求［３］。本实验根据指南要求完成该实验 过程，在研究过程中，坚持做好日常质控及维护，并按 照标准化操作规程进行试验操作。 ３．２实验对中生试剂及罗氏试剂直接胆红素测定系 统进行线性对比，研究过程中我们使用两个厂家提供 （下转第１８０１页） 西部医学２０１１年９月第２３卷第９期 Ｍｅｄ Ｊ Ｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．２３，Ｎｏ．９ 致ＤＶＴ形成的三大病因。髋部骨折围手术期深静脉 血栓高发生率与下列因素有关：①病人行关节置换手 术中，髋关节与膝关节常处于屈曲位，下肢呈被动扭 曲体位；术前术后下肢运动明显减少，术后局部肿胀 以及肢体活动进一步减少等引起下肢静脉血流淤滞。 的措施，是预防骨科髋部手术围手术期下肢深静脉血 栓形成的最简便、最安全、最经济、最有效的方法。而 围手术期有效预防可以极大地降低下肢深静脉血栓 的形成，提高了手术成功率，即使发生下肢深静脉血 栓形成也能得到早期发现与治疗，从而大大减低、甚 ②术中强力牵拉髋膝关节以使骨折复位或髋关节脱 位与复位、使用电刀与骨水泥热聚合反应，都可以使 局部血管内皮细胞受损，激活多种与凝血机制有关的 至避免致死性肺栓塞的发生，进而降低骨科髋部手术 围手术期死亡率。 【参考文献】 ［１］胥少汀．骨科手术并发症预防与处理［Ｍ］．北京：人民军医出版 社，２００６：２７７． 组织因子。③术后抗凝血酶Ⅲ降低，内源性纤维蛋白 溶解系统受到抑制，使血液呈现高凝状态，因而，围手 术期内如何避免以上三大病因是预防下肢深静脉血 栓形成的关键。术中轻柔操作、规范电刀及骨水泥的 使用方法是手术者应尽力做到的，术前术后的综合预 防方法是护理工作的重点。 ４结论 ［２］陈惠德，李 宁，邱繁荣，等．严重创伤和手术后患者凝血功能的 观察［Ｊ］．中国危重病急救医学，１９９９，６（６） ３６９—３７０． ［３３张黄丽，葛衡江．血栓弹力图和Ｄ一二聚体在髋关节置换术患者 围术期的变化［刀．武警医学院学报，２００９．１８（４）３１３． （收稿日期：２０１１－０３－２３；修回日期：２０１１－０７—１３；编辑：何兴华） 基本预防、机械预防护理方法与药物预防相结合 （上接第１７９８页） 本实验采用中生配套系统测定直接胆红素，通过 对配套检测系统的验证表明，检测结果能满足临床要 的配套试剂及配套标准品进行校准，对试验结果进行 相关分析研究，以评价两个系统之间误差，从图１～４ 可以看出，两操作系统之间相关性良好，但有一定的 求，与罗氏直接胆红素试剂相关性良好，较好解决了 直接胆红素开放的匹配系统实现检测结果的溯源问 题。 【参考文献】 ［１］袁水斌，徐光明，邓荣春，等．新型化学氧化法测定胆红素试剂的 研制［Ｊ］．江西医学检验．２００７。２５（３）：２０１—２０６． 负偏差。经对中生校正品重新赋值后偏差消失，说明 可能与标准品赋值有关，与操作系统及试剂没有明显 的关系。 ３．３ 随着（ＩＳＯ）１５１８９正式成为国家标准和实施后， 检测系统（检测仪器、试剂、校准品和质控品、常规操 作程序）定量检测结果具有可溯源性已成为各实验室 急需解决的问题。为减少不同检测系统对结果的影 响，要求采用完全配套的检测系统一封闭系统。但因成 本等原因，目前国内实验室采用配套检测系统的医院 ［２］Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ｝ａｐｐ ｒｏｖｅｄ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ２ｓｅｃｏｎｄｅｄｉｔｉ０ｎ［Ｓ］．ＥＰ５２Ａ２。ＮＣＣＬＳ，２００４． ［３］ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂ０ｒａｔｏｒｙＳｔａｎｄａｒｄｓ． Ｍｅｔｈｏｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ ｂｉａｓ ｅｓｔｉ２ｍａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｐａｔｉｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ［Ｊ］．Ａｐ— ｐｒｏｖｅｄ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ，ＥＰ９Ａ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９５，１５（７）：１－２． 较少，通过建立开放的匹配系统实现检测结果的溯源 是解决目前现状的有效途径。 ４ 结论 （收稿日期：２０１１－０６－２０；编辑：母存培）