中华危重症医学杂志（电子版）２０１５年１２月第８卷第６期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｌ Ｑｎ］，卫 尘堕２ ， Ｑ！： Ｑ： ・・３４７・ 论著・ 促红细胞生成素受体干扰ＲＮＡ慢病毒 表达载体的构建及干扰细胞的筛选 呼格吉乐 【摘要】 目的构建人促红细胞生成素受体（ＥＰ０Ｒ）干扰ＲＮＡ慢病毒（Ｌｖ）表达载体，并筛 构建人 选出ＥＰＯＲ能稳定干扰人脑胶质细胞瘤Ｕ２５１细胞的最佳感染复数（ＭＯＩ）。 方法ＥＰＯＲ干扰ＲＮＡ慢病毒表达载体，即ＬＶ．ＥＰＯＲ，收集病毒，检测病毒滴度后感染人脑胶质细胞瘤 Ｕ２５１细胞（ＬＶ．ＥＰＯＲ—Ｕ２５１细胞），根据ＭＯＩ值的不同分为ＭＯＩｌ ＭＯＩ ＭＯＩ。组，选出荧光表达 量最高的一组，经ＲＴ．ＰＣＲ检测ｍＲＮＡ表达，计算干扰效率。 结果胞荧光表达量最高，其干扰效率为７２％。 结论将目的序列成功连接到载 体上，并经测序分析证实载体构建成功。经ＲＴ．ＰＣＲ检测结果证实，ＭＯＩ 组的ＬＶ．ＥＰＯＲ．Ｕ２５１细 成功构建ＬＶ．ＥＰＯＲ，ＬＶ．ＥＰＯＲ—Ｕ２５１细胞稳定 干扰的ＭＯＩ值为１００。 【关键词】干扰ＲＮＡ：促红细胞生成素受体：慢病毒；胶质瘤 Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｃｅｌｌｓ Ｈｕｇｅｊｉｌｅ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｆｉｌｆｉｔａｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｉｎｎｅｒ Ｍｅｎｇｏｌｉａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｕｈｅｈａｏｔｅ ０１００５￣Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｈｕｇｅｊｉｌｅ，Ｅｍａｉｈ ｈｕｊｉｌｅ０７＠１６３．ｃｏｎ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＥＰＯＲ）ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ（ＬＶ），ａｎｄ ｔｏ ｓｃｒｅｅｎ ｏｕｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｍｕｌｔｉｐｌｙ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（ＭＯＩ）ｏｆ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ ｏｆ ｓｉＲＮＡ ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｓｔａｂｌｙ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ ｔｈｅ ＥＰＯＲ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ Ｕ２５ １ ｇｌｉｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＬＶ—ＥＰＯＲ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｅｓｔｅｄ ｆｏｒ ｖｉｒｕｓ ｔｉｔｅｒ，ｔｈｅｎ ｉｆｅｃｔｅｄ ｎｔｈｅ Ｕ２５ １ ｇｌｉｏｍａ ｃｅｌｌｓ（ＬＶ－ＥＰＯＲ—Ｕ２５ １ ｃｅｌｌｓ）．ＬＶ—ＥＰＯＲ－Ｕ２５ １ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｇｒｏｕｐ ＭＯＩ，０ｅ，ｇｒｏｕｐ ＭＯＩ１０ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ ＭＯＩ１．Ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＥＰＯＲ ｍＲＮＡ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＲＴ－ＰＣＲ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ。ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｗａｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ＬＶ—ＥＰＯＲ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｇｒｏｕｐ ＭＯＩｌ０ｏ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｇｒｏｕｐｓ． Ｇｒｏｕｐ ＭＯＩｌ００ ｃｏｕｌｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＥＰＯＲ ｍＲＮＡ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ（ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ：７ １．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＬＶ－ＥＰＯＲ ｉｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｏｎｓｔｕｃｔｒｅｄ， ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ＭＯＩ ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｕ２５ １ ｃｅｉｌｓ ｉｓ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｏｕｔ ｔｏ ｂｅ １００． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ＲＮＡ；ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ；Ｇｌｉｏｍａ 人脑胶质细胞瘤侵袭、转移能力强，生长快， 胞生成素（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＥＰＯ）是一种酸性糖蛋白， 和促红细胞生成素受体（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ， ＥＰＯＲ）结合共同作用，可促进红细胞的生成及骨 髓红系祖细胞的生长并抑制红系祖细胞凋亡等。 近年来有研究表明，ＥＰＯＲ在胶质瘤、小细胞及非 故预后差，且其发病机制目前仍不清楚【ｌＪ。促红细 ＤＯｈ １０．３８７７／ｃｉｌｉａ．Ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—６８８０．２０１５．０６．００３ 基金项目：内蒙古科技厅应用技术研究与开发资金资助项目 （２０１２０４０６）；内蒙古自治区卫生和计划生育委员会医疗卫生科研计 划项目（２０１３０３０６２）；内蒙古自然科学基金资助项目（２０１２ＭＳ１１４７） 作者单位：０１００５０呼和浩特，内蒙古医科大学附属医院检验科 通信作者：呼格吉乐，Ｅｍａｉｌ：ｈｕｊｉｌｅ０７＠１６３．ＣＯＢ 小细胞肺癌、直肠癌、舌鳞癌、前列腺癌等恶性肿 瘤中表达，且在其发生发展过程中可能起着重要 作用［２．８】。目前，关于ＥＰＯＲ在胶质瘤中表达、侵袭 （电子版）２０１５年ｌ２月第８卷第６期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ｆＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｔｉ０ｎ Ｄｅｅｅｍｂｅｒ ２０１５．Ｖｏ１．８ Ｎｏ．６ 等方面的研究结果并不一致。本研究利用ＲＮＡ干 扰技术构建ＥＰＯＲ干扰ＲＮＡ慢病毒表达载体，对 其进行病毒包装、病毒收集及滴度检测后感染人 脑胶质瘤Ｕ２５１细胞，计算不同梯度的ＭＯＩ值 （ｍｕｌｔｉｐｌｙ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，感染复数即感染时病毒与细 胞数量的比值），挑选最佳ＭＯＩ值的细胞组，为进 一步研究ＥＰＯＲ沉默后蛋白质组学水平及转录水 平的变化奠定实验基础。 １材料与方法 １．１实验材料 人脑胶质瘤Ｕ２５１细胞株和人胚肾细胞２９３ Ｔ 细胞株，购自中科院上海细胞库；ＤＮＡ凝胶回收试 剂盒、琼脂糖等购白天根生化科技有限公司；慢病 毒（１ｅｎｔｉｖｉｒｕｓ，ＬＶ）３穿梭质粒和包装质粒ｐＧａｇ／ Ｐｏｌ、ｐＲｅｖ、ｐＶＳＶ—Ｇ购自上海吉玛公司，培养基和胎 牛血清购自美国Ｇｉｂｃｏ公司。 １．２实验方法 １．２．１重组穿梭质粒的构建 针对ＥＰＯＲ的ｃＤＮＡ设计干扰序列： ＣＴＡＣＡＧＣ ｒＩｖＩ’ＣＴＣＣＴＡＣＣＡＧ，插入到ＬＶ３穿梭质粒 中构成重组穿梭质粒，测序鉴定。 １．２．２病毒包装 在１５ ｃｍ培养皿中接种包装细胞２９３ Ｔ细胞， 培养过夜。按照说明书上的方法在无菌离心管中 加入比例培养基、重组ＥＰＯＲ干扰ＲＮＡ的穿梭质 粒和包装质粒（ｐＧａｇ／Ｐｏｌ、ｐＲｅｙ、ｐＶＳＶ－Ｇ）。取另一 支无菌离心管，加入培养基，再加入转染试剂混 匀。室温放置５ ｍｉｎ后，将两个离心管混合，将转染 混合物加入已放有８ ｍｌ培养基的１５ ｃｍ培养皿 中，混合均匀后在培养箱中温育５ ｈ，弃转染液，加 入１８ ｍｌ １０％血清的培养基，继续培养７２ ｈ。 １．２．３病毒收集 将培养皿中的液体吸至离心管中，低速离心 后，将上清液吸入注射器内，用０．４５ ｍ滤器过滤 后进行超速离心。 １．２．４病毒滴度检测 按３×１０ 个细胞／孔的浓度把２９３ Ｔ细胞接 种于９６孔板，过夜培养。将慢病毒原液ｌ０ ｌ用 １０％血清的培养基梯度稀释至４个梯度，分别加入 每个孔，培养２４ ｈ。弃孔中病毒液，再加入常规培 养基继续培养７２ ｈ。有上海吉玛公司帮助下计算 病毒滴度，并确定为１×１０ｓ ＴＵ／ｍｌ。 １．２．５感染人脑胶质瘤Ｕ２５１细胞 接种５×１０ 个Ｕ２５１细胞／孔于９６孔培养 板，过夜。把１×１０ ＴＵ／ｍ１）的ＬＶ—ＥＰＯＲ病毒分别 进行ｌ０倍稀释和１００倍稀释，将稀释１、１０、１００ 倍的病毒液各取ｌ０ １分别加到三个孔中，再加入 ９０ ｌ的培养基。计算三个孔的ＭＯＩ值，分别为 １００、１０、１，设定为ＭＯＩ１００组、ＭＯＩ１０组、ＭＯＩｌ组。培 养７２ ｈ后，观察荧光表达量，选择表达最高的一组 进行后续检测。 １．２．６ ＲＴ．ＰＣＲ检测ＥＰＯＲ ｍＲＮＡ的表达 对未经处理的Ｕ２５１细胞（Ｕ２５１组）及荧光表 达量最高的一组ＬＶ—ＥＰＯＲ—Ｕ２５１细胞（ＬＶ—ＥＰＯＲ— Ｕ２５１组）进行ＥＰＯＲ ｍＲＮＡ检测。分别提取两组的 总ＲＮＡ，进行ＲＴ．ＰＣＲ反应，ＥＰＯＲ上游引物为５ 一 ＣＧＧＧＣＡＡＣＴＡＣＡＧＣ１ＴｒＣＴＣＣ．３ ， 下游引物为５ ． ＧＴＡＧＧＣＡＧＣＧＡＡＣＡＣＣＡＧＡＡ．３ 。 磷酸甘油醛脱氢酶（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＧＡＰＤＨ） 上游引物为５ 一 ＣＧＧＧＡＡＡＣＴＧＴＧＧＣＧＴＧＡＴ．３ ， 下游引物为５，＿ ＧＡＧＴＧＧＧＴＧＴＣＧＣＴＧＴＦＧＡ一３ 。 每组设３个平行样本，即每组的ＰＣＲ产物分 别平行加到３块１．５％琼脂糖胶上进行分离，用凝 胶分析软件分析条带光密度。ＥＰＯＲ整合光密度值 （ｉｎｔｅｇｒａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ ｖｏｌｕｍｅ，ＩＤＶ）与ＧＡＰＤＨ的ＩＤＶ 比值（ＩＤＶ唧／ＩＤＶｃ ）为ＥＰＯＲ ｍＲＮＡ的相对表 达量。以Ｕ２５１组ＥＰＯＲ ｍＲＮＡ的相对表达量为 “１”，计算各组的干扰效率，即ｆ１一（每组ＥＰＯＲ ｍＲＮＡ的相对表达量）／（Ｕ２５１组ＥＰＯＲ ｍＲＮＡ的 相对表达量）］×１００％。 ２结果 ２．１穿梭质粒测序结果 碱基序列测定结果表明，所有的ＥＰＯＲ重组穿 梭质粒与所设计的序列完全相同，并且没有发现 任何异常，见图１。 一羹囊■纛一■ 一 纛Ｔ Ａ ｃ Ａ Ｇ ｃ Ｔ Ｔ ｃ Ｔ ｃ ｃ Ｔ Ａ ｃ ｃ Ａ ６ ／＼／＼／＼Ｍ／＼／＼『＼／＼氏 图１促红细胞生成素重组穿梭质粒靶序列测序图 ・３５０・ 中华危重症医学杂志（电子版）２０１５年ｌ２月第８卷第６期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１５，Ｖｏ１．８ Ｎｏ．６ ＲＮＡ对人脑胶质瘤增殖影响ｆＪ］．中国公共卫生杂 志，２０１３，２９（６）：８５５—８５７． ２ Ｍｏｈｙｅｌｄｉｎ Ａ，Ｄａｌｇａｒｄ ＣＬ，Ｌｕ Ｈ，ｅｔ ａ１． Ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｔｅｄ ＪＡＫ２／ＳＴＡＴＳ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｔｈｅ ＴＦ一１／Ｅｐｏ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ［Ｊ］． Ａｓｉａｎ Ｐａｃ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ，２０１４，１５（６）：２４５３—２４５９． １４ Ｍｉｌｊｕｓ Ｎ，Ｈｅｉｂｅｅｋ Ｓ，Ｊａｒｒａｒ Ｍ，ｅｔ ａ１． Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉ ｅｔｉｎ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｓｅｃｔ ｂｒａｉｎ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ａｓｔｒｏｃｙｔｏｍａｓ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｂｙ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ，２００７，１０６（２）：３３８－ ３５０． ｖｏｌｖｅｓ ＪＡＫ ａｎｄ ＳＴＡＴ ｂｕｔ ｎｏｔ ＰＩ３Ｋ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ３ 徐舒，岳志健．促红细胞生成素及其受体与胶质瘤 Ⅲ．中国微侵袭神经外科杂志，２００８，１３（８）：３８２— ３８４． ｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４，２５８：２１８—２２７． １５ Ｂｉａｌｋｏｗｓｋａ ＡＢ，Ｃｒｉｓｐ Ｍ，Ｂａｎｎｉｓｔｅｒ Ｔ，ｅｔ ａ１． Ｉｄｅｎｔｉ ｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｍａｌ１．ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｌｏｒｅｃｔｌ ａｅａｎｅｅｒｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｋｒｕｐｐｅｌ－ｌｉｋｅ ｆａｃｔｏｒ ５ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ４ 张连国，徐海涛，张庆广，等．促红细胞生成素及其受 体在肺癌组织中的表达『Ｊ］．滨州医学院学报， ２０１３，３６（３）：１６９．１７１． ｕｌｔｒａｈｉｇｈ—ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ［Ｊ１． Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ， ２０１１，１０（１１）：２０４３—２０５１． １６ Ｃｕｉ Ｊ，Ｈｏｌｍｅｓ ＥＣ． Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ５ 俞婷婷，单莉，韩志刚．非小细胞肺癌组织中促红细 胞生成素及其受体ｍＲＮＡ的表达及意义［Ｊ］．１临床肿 瘤学杂志，２０１３，１８（３）：２０３．２０６． ｆｅｒｒｅｔ ｇｅｎｏｍｅ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２０１２，８６（６）：３３８３—３３８５． １７ Ｗａｎｇ Ｌ，Ｚｈａｉ Ｗ，Ｙａｎｇ Ｘ，ｅｔ ａ１． 【Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ— ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｔａｂｌｅ Ｆａｓ ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｉｎ ｈｕｍａｎ ６ 任潇毅，柯其广，牛跃平．促红细胞生成素及其受体 在直肠癌中表达及临床意义『Ｊ】．中华实用诊断与治 疗杂志，２０１１，２５（１）：４８—５１． ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ—ｄｅｉｒｖｅｄ ｍｅｓｅｎｅｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｉｌｓ．】［Ｊ】． Ｎａｎ Ｆａｎｇ Ｙｉ Ｋｅ Ｄａ Ｘｕｅ Ｘｕｅ Ｂａｏ，２０１４，３４（１０）： １４７５．１４８０． １８ Ｌａｗｓｏｎ ＳＫ，Ｄｏｂｆｉｋｏｖａ ＥＹ，Ｓｈｖｅｙｇｅ￣Ｍ，ｅｔ ａ１． ７ 武东辉，李劲松，李海刚，等．舌鳞癌红细胞生成素及 其受体的表达和临床意义［Ｊ／ＣＤ］．中华口腔医学研究 杂志：电子版，２０１０，４（１）：５６．６２． 陈光华，周铁，许传，等．促红细胞生成素和受体在前 ｐ３８ａ ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ 列腺癌组织中共同过表达的研究『Ｊ］．现代生物医学 进展，２０１２，１２（３６）：７０７０．７０７６． ９ ｍａｃｈｉｎｅｒｙ ｂｙ ｍｉＲ一１２４ ａｎｄ一１２８ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎｓ【Ｊ１． Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２０１３，３３（１）：１２７—１３５． １９ Ｔａｎ Ｇ，Ｎｉｕ Ｊ，Ｓｈｉ Ｙ，ｅｔ ａ１． ＮＦ．ＫＢ．ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｉｅｒｏＲＮＡ－－１２５ｂ ｕｐ－－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｃｅｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ 张红岩，任野平，丁勇．促红细胞生成素及其受体的 研究进展ｆＪ］．临床荟萃，２０１４，２９（５）：５８５．５８９． 黄文志，李倩庆，王露，等．阻断促红细胞生成素抑制 小鼠对视网膜新生血管生成［Ｊ］．国际眼科杂志， ２０１５，１５（４）：６０５．６０７． １ｌ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐ３８ａ ｕｐｏｎ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｒａｄｉａｔｉｏｎ【Ｊ］． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０１２，２８７（３９）：３３０３６．３３０４７． ２０ Ｄｏｎｇ Ｘ，Ｌｉｕ Ａ，Ｚｅｒ Ｃ，ｅｔ ａ１． ｓｉＲＮＡ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ａｎｔｉ—ｃａｎｃｅｒ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ 张嘉熙，邓红燕，纪茗权，等．红细胞生成素及其受体 对成骨细胞的作用机制［Ｊ］．国际口腔医学杂志， ２０１５，４２（１）：１０２—１０５． Ｃｈｏｎｇ ＺＺ，Ｓｈａｎｇ ＹＣ，Ｍｕ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃｒｙ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ】 ＢＭＣ Ｃａ．ｎｃｅｒ， ２００９（９１：１３３． ｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ｆｏｒ ｃｈｒｏｎｉｃ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］． Ｅｘｐｅ￣Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｔａｒｇｅｔｓ，２０１３，１７（６）：７０７—７２０． （收稿日期：２０１５．０２．１８） （本文编辑：张莹） Ｌｉ Ｊ，Ｗｅｉ Ｑ，Ｚｕｏ ＧＷ，ｅｔ ａ１． Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇｌ ｉｎ ｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＥｐｏＲ—ｍｅｄｉ 呼格吉乐．促红细胞生成素受体干扰ＲＮＡ慢病毒表达载体的构建及干扰细胞的筛选［Ｊ／ＣＯ１．中华危重症医学杂志：电子 版，２０１５，８（６）：３４７．３５０．