pcr实验报告

DNA是人类几百年来一直寻找的遗传密码，在近几十年里，对这一成果的研究取得了突飞猛进的进展。生物课程中也加入了对DNA 的学习课程，让学生门感受到现代科技取得的进步，体验到科技的乐趣.

2016年暑假的前几天，我们能有幸的成为第一批做PCR实验的学生，为了能够更好的完成实验，在做实验前的晚上，我回家上网上查询了们关于本次实验的，一些信息，以避免实验室、时不必要的错误。查询的内容包括实验的历史信息，提出这个实验的人，实验的原理，目的，做实验所准备的器材，实验当中的操作步骤，及注意事项等。

PCR,即聚合酶链式反应Khorana (1971)等最早提出核酸体外扩增的设想：“经DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可合成tRNA基因。”

但由于当时基因序列分析方法尚未成熟，热稳定DNA聚合酶尚未报道以及引物合成的困难，这种想法似乎没有实际意义。加上70年代初分子克隆技术的出现提供了一种克隆和扩增基因的途径，所以，Khorana的设想被人们遗忘了。

1985年，Kary Mullis在Cetus公司工作期间，发明了PCR。Mullis要合成DNA引物来进行测序工作，却常为没有足够多的模板DNA而烦恼。

1983年4月的一个星期五晚上，他开车去乡下别墅的路上,猛然闪现出“多聚酶链式反应”的想法。

1983年12月，Mullis用同位素标记法看到了10个循环后的49 bp长度的第一个PCR片段；

1985年10月25日申请了PCR的专利，1987年7月28日批准（专利号4,683,202 ），Mullis是第一发明人；

1985年12月20日在Science杂志上发表了第一篇PCR的学术论文，Mullis是共同作者；

1986年5月，Mullis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开始学习PCR的方法。

从PCR的提出到推广到世界，仅用了短短的十五年，比起世界上其他实验的曲折历程，PCR的推广可以说是及其迅速的。目前pcr多用于大量目标片段或基因工程检测

PCR的原理DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。 但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。

耐热DNA聚合酶--Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大taq酶量应用，并逐步应用于临床。

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

PCR仪器

1. 移液器 移液器又称移液枪，是一种用于定量转移液体的器具，被广泛用于生物、化学等领域。

2.高速离心机 高速离心机属常规实验室用离心机，广泛用于生物，化学，医药等科研教育和生产部门 ，适用于微量样品快速分离合成。

3. PCR仪 简单的说，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术，可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准

实验步骤：1：取材毛囊细胞或口腔上皮细胞

2PCR反应体系，0.2mg离心管+16ul预混液 3PCR得到扩增的目的基因 4制胶

5PCR的到的目的基因加2ul（loading buffer1ul+荧光染料1ul）

6点样18ul 8电泳

9对电泳图进行观察

虽然查阅了大量的资料，学习了PCR的实验步骤，原理。但到自己真正做实验的时候却频频出错，第一步时，我选择了口腔上皮细胞，但在加预混液时就出现了问题，取液时候没选好量程，开始变出现了失误。在加入荧光涂料的时候没有取够，连续取了几次，这还是在看了我前面的人犯错后又犯了相同的错误，很是惭愧。最后，在将液体打入胶中的时候把，打进去的液体又吸了回来，出错后还疑问为什么液体没有打进去。在将液体打入后进入了等待的时间，上面出现了数次失误，心里想怎么样也不会成功了，最后看到结果时，发现自己并没有失败，虽然嘴角只是微微翘起，但心中的喜悦远胜于此。

PCR实验只是我们步入高中以来的第一次称得上是高科技的实验，在未来，这个科技急速发展的年代，谁知道还会带给我们什么样的

惊喜。在我们身边的种种事物都是那么的神秘。生物的DNA虽然说在这个年代得到了很快的发展，但等待人们去解决的未知的谜团还不知道有多少。但无论怎样都应当以严谨认真的态度去对待，实验中有小失误还是会成功，但这个实验终究是不完美的，实验的结果会出现细微的误差。误差不可避免，但是可以减小。我希望以后无论对待什么，都应当尽量避免失误，哪怕是0.01，最后带来的结果可能就是整个团队的失败。