农业与技术第３３卷第３期２０１３年３月 黄山率水河及周边居民生活饮用水微生物污染状况调查 蒋大庆 ，董丽丽 （１．贵州大学生命科学学院，贵州贵阳５２００２５；２．黄山学院生命与环境科学学院，安徽黄山２４５０４１） 摘要：本文采用平板茵落计数和多管发酵法，对黄山率水河及周边居民生活饮用水的细菌总数和大肠杆菌进行了测定。结果表明， 率水河水样属于不清洁水，大肠杆菌严重超标；东临溪镇、野东村、芳口村水样属于清洁水，根据生活饮用水卫生细菌学指标，率 水河水样不符合饮用水标准，东临溪镇、野东村、芳口村水样符合生活饮用水指标。 关键词：生活饮用水；水中细菌；大肠杆茵 中图分类号：Ｒ１２３．１ 水是维持人体正常生命活动所必需的物质之一，直接关系 到人类的生存和发展。众所周知，水体中细菌总数往往同水体 受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的重要 指标之一，水体中大肠杆菌菌群数受到人、牲畜粪便的排放以 及生活垃圾污染的程度呈正相关，是评定饮用水被粪便污染的 重要指标。在黄山，由于农村一体化供给水的利用率极低，家 家户户使用井水的习惯仍然存在，获得安全卫生饮用水方面还 存在着不少问题。水井设计与建造结构问题、农村粪便处理不 当、井水不消毒，影响农村居民饮用水卫生和身体健康［１－２］。 目前国内外对水质评价的方法很多 。本实验拟对黄山率水 河及周边农村居民生活饮用水中的细菌总数和总大肠菌群污染 状况进行调查研究，旨在对黄山率水河及周边农村居民生活饮 用水的水质作出初步评估。 １材料和方法 １．１水样的来源 本实验所涉及的几组水样分别取自率水河（新安江的支流， 率水河上、中、下游，其中中游附近是居民生活区，也是各种 生活和生产污水的排放地）、东临溪镇（居民使用地下水，主 要人、牲畜粪便的排放以及生活垃圾）、野东村（居民一直使 用井水，人、牲畜粪便的排放）、芳口村（几乎家家户户都用 自来水，但通过访问有些居民不习惯使用自来水，一直饮用井 水）、实验室自来水以及空白对照。 １．２水样的采集 在采集自来水水样时，先用酒精灯将实验室水龙头灼热 灭菌，再将水龙头完全打开，放水３ ４ｍｉｎ，以排除管道 内的死水，然后用无菌采样瓶采集水样备用。率水河、东临 溪镇、野东村和芳口村４处水样是在距离水面１０～１５ｃｍ 处分别从３个地点采集水样５０ｍＬ，采集后在实验室充分混 匀后备用。 １－３水的细菌学测定 将所取水样编号充分摇匀，用１０ｍＬ刻度吸管吸取１０ｍＬ 水样，注入盛有９０ｍＬ无菌水的三角容量瓶中，混匀成１０—１ 稀释液，吸取稀释液１０ｍＬ按ｌ０倍稀释法依次稀释成１０—２、 １０—３、１０—４等连续的稀释度。根据水样的洁净程度，率水河 选取１０—２、１０—３和１Ｏ一４三个连续稀释度，东临溪镇、野东村、 芳口村选取１００、１０—１、１０—２三个连续稀释度，自来水不需稀狡 吸取由高倍至低倍的稀释液，每个稀释液分别注入三个已制备 好的营养琼脂培养基培养皿上，每皿ｌｍＬ，空白对照不加任何 样品即可，然后将培养皿倒置于３７℃恒温培养箱培养２４ｈ后 取出计算其菌落数。 １．４水的大肠菌群测定 １６ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＥＡＮＤＬＴＥＣＨＮＯＬ０ＧＹ 文献标识码：Ａ １．４．１生活饮用水 １．４．１．１初发酵实验。将两个装有已灭菌的５０ｍＬ三倍浓缩乳糖 蛋白胨培养液的大试管（内有倒置杜氏小管），以无菌操作各 加入已充分混匀的水样１００ｍＬ。在１Ｏ支装有已灭菌的５ｍＬ三 倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒置杜氏小管），以 无菌操作加入充分混匀的水样１０ｍＬ，混匀后置于３７℃恒温箱 内培养２４ｈ。 １．４．１．２平板分离。上述各发酵管经培养２４ｈ后，将产酸、产气 及只产酸的发酵管分别接种于伊红美蓝培养基上，置于３７ ｃｃ 恒温箱内培养１８～２４ｈ后，挑选符合下列特征的菌落，取少 许涂片、革兰染色、镜检。伊红美蓝培养基上：深紫黑色，具 有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；淡 紫红色，中心色较深的菌落。 １．４．１－３复发酵试验。上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阳性的 杆菌，则挑选该菌落的接种于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养 液的试管中（内有倒置杜氏小管），每管可接种分离自同一 初发酵管的最典型菌落１～３个，然后置于３７℃恒温箱中 培养２４ｈ，有产酸、产气者（不论倒管内气体多少皆作为产气）， 即证实有大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群存在的阳性管 数，查ｂｌＰＮ大肠菌群检数表［６】，报告每升水样中的大肠菌 群数。 １．４．２水源水 将水样做１：１０、１：１００稀释，于各装有５ｍＬ三倍浓 缩乳糖蛋白胨培养液的５个试管中（内有倒置杜氏小管）， 分别加入１０ｍＬ水样；于各装有１０ｍＬ乳糖蛋白胨培养液的 ５个试管中（内有倒置杜氏小管），分别加入１ｍＬ水样； 再于各装有１０ｍＬ乳糖蛋白胨培养液的５个试管中（内有倒 管），分别加入ｌｍＬ１：１Ｏ稀释的水样。共计１５管，三个 稀释度。将各管充分混匀，置于３７ｑｃ恒温箱内培养２４ｈ。 其后检检验步骤同生活饮用水检验方法。根据证实总大肠 菌群存在的阳性管数，查ＭＰＮ检索表报告每升水样中的大 肠菌群数 】。 ２结果与分析 ２．１几种水样的稀释度选择及菌落的报告方式 根据水的细菌学报告原则将所测的六种水样的菌落总数报 告如表１。从表１可以看出，率水河水细菌数为３．７×１０４个／ ｍＬ；东临溪镇水细菌数为１．６×１０ 个／ｍＥ；芳口村水细菌数 为１．９ Ｘ １０ 个／ｍ１４野东村水细菌数为１．５×１０２个／ｍＬ。根据《农 村实施＜生活饮用水卫生标准＞标准》，率水河水样属于不清 洁水；东临溪镇、芳口村、野东村为清洁水，自来水水样为极 清洁水。 黄山率水河及周边居民生活饮用水微生物污染状况调查蒋大庆董丽丽 ２．２各水源水总大肠菌群ＭＰＮ报告方式 表２率水河总大肠菌群ＭＰＮ报告方式 行就是因为饮用水水源分别受伤寒病人粪便和致病性大肠埃希 菌污染所致。 众所周知，黄山是闻名世界的旅游城市，其生态质量的好 坏关系到安徽整个旅游业的发展。新安江是黄山的母亲河。是 黄山市人们生产和生活用水的主要来源，率水河属于新安江的 支流，因此其率水河水质的好坏影响到黄山市人们的生活，水 质的好坏就显得尤为重要。根据本文对水的细菌学和总大肠菌 群测定，我们发现率水河的水质属于不清洁水的，不符合《农 表３居民生活饮用水总大肠菌群ＭＰＮ报告方式 村实施＜生活饮用水卫生标准＞标准》１、２、３级水指标，已 经严重超标。董丽丽［１叫对率水河的水质评价也表明，率水河 水属于不清洁水。根据我们对黄山率水河及周边居民生活饮用 水微生物污染状况调查表明，初步说明了黄山对农村生活饮用 水源的卫生防护还是很有成效的。但是对于率水河的微生物污 染超标，我们要引起足够重视。 参考文献 见表２，实验室测得结果表明，率水河水每１ Ｌ样品中大 ［１Ｉ钟格梅，陈莉，李裕利，黎智．广西农村生活饮用水微生物污染状 １肠菌群细菌最近似值３．０ ｘ １０。个，《农村实施＜生活饮用水卫 况调查［Ｊ】．实用预防医学，２００４，１１（６）：３． 生标准＞标准》已经严重超标，见表３东临溪镇、芳口村和野 【２］杨刚．１３６份农村饮用水源水样本检测结果分析［Ｊ］．中国农村卫生事 东村每１Ｌ样品中大肠菌群细菌最近似值为１８个、１３个和１１个， 业管理，２００７（３）：２１２—２１３． 根据表４生活饮用水卫生水细菌学指标，东临溪镇、芳口村符 【３】左国超．一种新的水质评价方法——属性识别法［Ｊ］．现代电子技术， 合三级水指标，野东村符合二级水指标。 ２ｏｏ７（１）：１５７－１５８． 【４］莫崇勋，黎曦，樊新艺．灰关联分析方法在河道水质评价中的应用 表４生活饮用水卫生水细菌学指标 研究［Ｊ］．东北水利水电，２００７（１）：４７—５０． 【５］李奇珍，何俊仕．水质综合评价方法探讨【Ｊ］．人民黄河，２００７（１）： ５０—５２． ［６］鲁文清．总大肠菌群的测定［Ｊ］．预防医学实验教程，２００５（８）： １０８—１ ｌ２． ［７］周伟忠，倪大新，李孝风，等．江苏省１９９０～１９９４伤寒流行病学 分析【Ｊ】．江苏预防医学，Ｉ９９５，６（４）：１３—１４． ３讨论 【８］钟学峰．武冈市黄沙村伤寒水型暴发流行的调查［Ｊ］．实用预防医学， 本次调查结果表明，所采取的东临溪镇、芳口村和野东村 １９９８，５（１）：２７． 水样的检查结果按照《农村实施＜生活饮用水卫生标准＞标准》 【９】陈忠良．一起水型腹泻暴发流行的调查分析［Ｊ１．实用预防医学， 进行评价，符合１、２、３级水标准，率水河水样不符合１、２、 １９９８，５（２）：８１． ３级水指标，已经严重超标。有报道称 】，１９９０～１９９４年江 【ｌＯ］董丽丽．黄山市几种水体中细菌总数的测定与水质评价脚．资源开 苏省有７５％伤寒暴发由水污染引起。因此，率水河微生物指 发与市场，２００８，２４（１１）：９７１—９７２． 标污染严重，应引起足够重视。尤其是总大肠杆菌污染严重， 是评定饮用水被粪便污染的重要指标，粪便内可能存在一些肠 道致病微生物是肠道传染病介水传播的潜在隐患。钟学峰［８］报 道的伤寒水型暴发流行，以及陈忠良 报道的水型腹泻暴发流 ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＥＡＮＤＬＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ １７