・ｌ０・ 临京医学工程２０１１年１月第１８卷第１期 红细胞调控ＣＤ４／ＣＤ８的血细胞快速培养实验研究 郭峰 ，钱宝华 ，张乐之２张军 （第二军医大学长海医院 输血科血液免疫研究室 实验诊断科，上海２００４３３） 【摘要】 目的利用系统免疫学血细胞培养系统模式，在体外研究红细胞调控ＣＤ４／ＣＤ８规律及其意义。方法２２例人枸橼 酸抗凝新鲜血（１１例正常人和１１例原发性肝癌患者）。全血细胞培养组（自然组）：０．２ ｍｌ全血细胞悬液加０．３ ｍｌ血浆和０．２ ｍｌ 生理盐水，白细胞培养组（分离组）：０．２ ｍｌ白细胞悬液加０．３ ｍｌ血浆和Ｏ．２ ｍ１生理盐水，充分混匀，３７℃温育１小时，２ ０００ 转／分离心５分钟，两管的白细胞ＣＤ４和ＣＤ８表达水平用ＰＣ一５酶标抗ＣＤ４单抗和ＦＩＴＣ一酶标抗ＣＤ８单抗测定，红细胞调节 率＝（全血细胞培养组ＣＤ４或ＣＤ８或ＣＤ４／ＣＤ８水平一白细胞培养组ＣＤ４或ＣＤ８或ＣＤ４／ＣＤ８水平）÷白细胞培养组ＣＤ４ 或ＣＤ８或ＣＤ４／ＣＤ８水平。结果２２例全血细胞培养组ＣＤ４／ＣＤ８水平（１．４０±Ｏ．５９）明显高于白细胞培养组（Ｏ．４８±０．２６）， ｔ＝６．６９１８，Ｐ＜０．ｏ１，正常人的白细胞培养组ＣＤ４／ＣＤ８水平（０．５８±Ｏ．２７）明显高于肝癌的白细胞培养组ＣＤ４／ＣＤ８水平（Ｏ．３５± ０．１９，Ｐ＜０．ｏ１），正常人ＣＤ４／ＣＤ８调节率（２．４２±２．３９）高于肝癌患者ＣＤ４／ＣＤ８调节率（２．０７＋１．２７）。结论本实验研究属 于系统免疫学和计算免疫学领域，正常人红细胞能高调节ＣＤ４／ＣＤ８水平，在原发性肝癌中，细胞免疫功能低下，表现ＣＤ４／ ＣＤ８表达低水平与红细胞对ＣＤ４／ＣＤ８低调节率密切相关。 【关键词】 系统免疫学；原发性肝癌；ＣＤ４／ＣＤ８；红细胞吸附率；血细胞培养系统模式 中图分类号：Ｒ３９２—３３：Ｒ４４６．１１ 文献标识码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９３６￣．ｉｓｓｎ．１６７４－４６５９．２０１１．０１．００１０ Ｒｅｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ Ｃａｎ Ｒｅｇｕｌａｔｅ ＣＤ４／ＣＤ８ ｉｎ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ Ｃｕｌｔｕｒｅ ＧＵＯＦｅｎｇ ，ＱＩＡＮＢａｏｈｕａ ，ＺＨＡＮＧ Ｌｅｚｈｉ ２，ＺＨＡＮＧ Ｊｕｎ ｎ６ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｄｅｐｔ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２Ｄｅｐｔ ｏｆ Ｌａｂ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｃｈａｎｇｈａｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００４３３，Ｃｈｉｎａ） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｕｓｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｒａｐｉｄ ｂｌｏｏｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ，ｗｅ ｈａｖｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆＣＤ４／ＣＤ８ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄ Ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｕｒｅ ｇｒｏｕｐ：０．ｔ２ ｍｌ ｏｆｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ａｎｄ ０．３ ｍｌ ｏｆａｕｔｏ—ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ０．２ ｍｌ ｏｆ ｓａｌｉｎｅ；ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ：０．２ ｍｌ ｏｆ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ａｎｄ ０．３ ｍｌ ｏｆ ａｕｔｏ—ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ０．２ ｍｌ ｏｆ ｓａｌｉｎｅ， ｍｉｘｅｄ ｆｕｌｌｙ，ａｎｄ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ａｔ ３７℃ｆｏｒ ６０ ｍｉｎｕｔｅｓ，ｔｈｅｎ ｗｅｒｅ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅｄ ａｔ ２ ０００ ｒｏｕｎｄｓ ｐｅｒ ｍｉｎｕｔｅ ｆｏｒ ５ ｍｉｎｕｔｅｓ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＣＤ４ ａｎｄ ＣＤ８ ｏｎ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｗｏ ｔｕｂｅ ｂｏｓｏｍ ｍｉｘｔｕｒｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＦＩＴＣ－－Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ａｂｓ（ＣＤ８）ａｎｄ ＰＣ・－５－・ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ａｂｓ ｒＣＤ４）．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ＝（１ｅｖｅｌ ｏｆ ＣＤ４ ｏｒ ＣＤ８ ｏｒ ＣＤ４／ＣＤ８ ｉｎ ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅ—ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＣＤ４ ｏｒ ＣＤ４／ＣＤ８ ｉｎ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｕｒｔｅ）÷ｌｅｖｅｌ ｏｆＣＤ４ ｏｒ ＣＤ８ ｏｒ ＣＣＤ４／ＣＤ８８ ｉｎ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｕｒｔｅ．Ｒｅｓｕｌｔ Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ（１．４０ ４－０．１９）ｏｆＣＤ４／ ＣＤ８ ｉｎ ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｕｒｔｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ（０．４８ ４－０．２６）ｏｆ ＣＤ４／ＣＤ８ ｉｎ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅ（ｎ＝２２，ｔ＝６．６９ １ ８， Ｐ＜０．０ １）．Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ（０．５８ ４－０．２７）ｏｆ ＣＤ４／ＣＤ８ ｉｎ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｐｅｏｐｌｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｈａｎ ｔｔｈａｔ（０．３５ ４－０．１ ９） ｏｆＣＤ４／ＣＤ８ ｉｎ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆｐａｔｉｅｎｔ ｗｈｉｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｅｐａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ（ｎ＝ｌ ｌ，ｔ＝４．４００３，Ｐ＜０．０１），ＣＤ４／ＣＤ８ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｒａｔｅ（２．４２ ±２．３９）ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｐｅｏｐｌｅ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｒ２．０７ －１．４２７）ＣＤ４／ＣＤ８ ｒｅｕｌｇａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔ ｗｉｈ ｔＰ．Ｈ．Ｃ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ— ｔａｌ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ａ ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｉｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｃａｎ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆＣＤ４／ＣＤ８．Ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｅｐａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒｅ ｉｓ ａ ｃｌｏｓｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｌｏｗ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆＣＤ４ １ ＣＤ８ ａｎｄ ｌｏｗ ＣＤ４ ｉ ＣＤ８ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｒａｔｅ ｏｆｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；Ｐｒｉｍａｒｙ ｈｅｐａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ；ＣＤ４／ＣＤ８；Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ；Ｂｌｏｏｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ 红细胞固有免疫系统能调控Ｔ淋巴细胞免疫功能已有人报 ＣＤ４／ＣＤ８比值，可使ＣＤ４阳性率上升，而ＣＤ８阳性率下降。 道，认为红细胞是Ｔ淋巴细胞活性的调节器Ⅲ。我们采用全血 而原发性肝癌患者ＣＤ４／ＣＤ８比值低，红细胞对ＣＤ４／ＣＤ８正 细胞快速培养系统模系和白细胞快速培养系统模系比较计算免 调控率也有所下降。红细胞使ＣＤ４数量上升，而ＣＤ８数量下 疫学方法研究，发现红细胞可在血细胞快速培养系统模系调控 降的现象与意义，以及在疾病系统免疫学发病机制中的作用值 得进一步研究，现将资料报道如下： 牧槁日期：２０１０—０９—０９修回日期：２０１０—１２—１６ 基金项目：国家自然科学基金项目“现代系统免疫学自然与分离体系 １材料与方法 实验研究”（批准号３０６７１９４０）。 １１主要试剂和仪器．枸橼酸抗凝新鲜血来自长海医院输血科 作者简介：郭峰（１９３９一），男，安徽省黄山市人，研究员，中国免 血站１ｌ例青壮年献血员和确诊原发性肝癌患者１１例（ＡＦＰ强 疫学会血液免疫分会副主任委员，国务院政府特殊津贴获得医学专 家，研究方向：红细胞免疫学和系统免疫学。 阳性住院患者）ｃＤ４和ＣＤ８测定采用直接免疫荧光流式细胞仪 测定法ＣＤ４单抗（Ｐｃ一５）和ＣＤ８单抗（ＦＩＴＣ）标记，购于美 ，，临京医学工柱２０１１年１月第１８卷第１期 国ＢＤ公司，ＢＤ—ＦＡＣＳＣＡＮ型流式细胞仪为美国ＢＤ公司产品。 １．２方法 与ＣＤ４／ＣＤ８比值都明显高于相应的白细胞培养组，差异非常 显著（Ｐ＜０．０５或＜０．０１，表３），而这两种人群的全血细胞培养 １．２．１全血细胞悬液制备取３ ｍｌ新鲜枸橼酸抗凝血放１０ ｍｌ试 组ＣＤ８水平都低于相应白细胞培养组值（表３），原发性肝癌两 管，２ ５００转／分，离心半径２０ ｃｍ，离心５分钟后取上层血浆 种培养组ＣＤ４，ＣＤ４／ＣＤ８值都低于正常人相应培养组，而肝 至另一试管中，在原试管中用生理盐水恢复血细胞沉淀为原体 癌患者ＣＤ８值两种培养组都高于正常人相应培养组（表３）。 积（３ ｍ１），混匀后为全血细胞悬液（含红细胞和所有血细胞）。 表３原发性肝癌患者与正常人全血细胞培养组与白细胞培养组 ＣＤ４／ＣＤ８比值测定结果比较 １．２．２白细胞悬液制备采用冰水破坏红细胞法制备，详见文南ｌｃ【ｑ。 １．２．３实验设计全血细胞快速培养组：全血细胞悬液０．２ ｍｌ， 自身血浆０．３ ｍ１．生理盐水０．２ ｍｌ：白细胞快速培养组：白细 胞悬液０．２ ｍｌ，自身血浆０＿３ ｍｌ，生理盐水０．２ ｍｌ，混匀，置 ３７℃培养１小时后，２ ５００转／分（离心半径２０ ｅｍ）离心５分 钟后，取沉淀细胞层，混匀后，测定淋巴细胞ＣＤ４、ＣＤ８分 子，用直接荧光免疫测定法，在同一试管中加抗ＣＤ４和ＣＤ８ 荧光标记单抗．按常规程序测定．最后用流式细胞仪测定ＣＤ４ 和ＣＤ８阳性率。 红细胞调节率＝（全血细胞培养组结果一白细胞培养组结 果）÷白细胞培养组结果。 注： 与正常人白细胞培养组相比，ｔ＝３．８７１９，Ｐ＜Ｏ．０５； 与肝癌 白细胞培养组相比，ｔ＝１．７３５０，Ｐ＞Ｏ．０５； 与肝癌白细胞培养组相比， ｔ＝７．９４８８，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１； 与正常人白细胞培养组相比，ｔ＝４．６９８２，Ｐ＜ ０．０ｌ； 与肝癌白细胞培养组相比，ｔ＝２．３１０５，Ｐ＜Ｏ．０５； 与肝癌白细 胞培养组相比．ｔ＝４．４００３．Ｐ＜０．Ｏ１ １．３统计学处理采用ｔ检验，求ｔ值和Ｐ值，尸＜０．０５为差异 具有统计学意义。 ２结果 ２．１ ２２例全血细胞培养组与白细胞培养组ＣＤ４／ＣＤ８水平比较全 ２．４原发性肝癌患者与正常人全血细胞培养组红细胞对ＣＤ４／ 血细胞培养组ＣＤ４以及ＣＤ４／ＣＤ８测定结果都明显比白细胞快 ＣＤ８调控率比较发现原发ｌ生肝癌患者与正常人红细胞对ＣＤ４与 速培养组高，而ＣＤ８阳性率前组明显低于后组（详见表１）。 表１ ２２例全血细胞和白细胞快速培养组ＣＤ４与ＣＤ８测定结果比较 ＣＤ４／ＣＤ８的调控率都明显高于对ＣＤ８的调控率，而原发Ｉ生肝癌 患者红细胞对ＣＤ４／ＣＤ８比值的调控率低于正常人红细胞对ＣＤ４／ ＣＤ８比值的调控率，因例数少，差异无统计学意义（表４）。 表４原发性肝癌患者与正常人红细胞对ＣＤ４／ＣＤ比值调控率的比较 注： 白细胞培养组相比，ｔ＝２．６６０１，Ｐ＜０．０５； 与白细胞培养组相 比，ｔ＝２．４９９０，Ｐ＜０．０５； 与白细胞培养组相比，ｔ＝６．６５１８，Ｐ＜０．０１ ２＿２ ２２例全血细胞快速培养组红细胞对ＣＤ４、ＣＤ８，ＣＤ４／ｃＤ８ 调控率比较将资料用计算免疫学研究方法进行统计分析，发现 红细胞对ＣＤ４调控率平均值为２．１７（即２ｔ７％），而对ＣＤ８的调 控率平均值为－０．１８（即一１８％），差异非常显著（Ｐ＜０．０１），红细 胞对ＣＤ４／ＣＤ８调控率平均值为２．２５（即２２５％），红细胞对ＣＤ４ ／ＣＤ８比值为明显的正调控，增强Ｔ淋巴细胞免疫功能（表２）。 表２ ２２例红细胞对ＣＤ４，ＣＤ８及ＣＤ４／ＣＤ８比值调控比较 注： 正常人ＣＤ８组相比，ｔ＝５．６４９２，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１； 与正常人ＣＤ４／ＣＤ 组相比，ｔ＝４．５４４５，Ｐ＜Ｏ．叭； 与肝癌患者ＣＤ８组相比，ｔ＝６．７６７５，Ｐ ＜Ｏ．Ｏｌ； 与肝癌ＣＤ４／ＣＤ组相比，ｔ＝５．６１９７，Ｐ＜０．Ｏ１ ３讨论 我们从全血细胞快速培养系统模式和白细胞快速培养系统 模式实验研究对比ＣＤ４／ＣＤ８比值，发现红细胞的存在，可使 注： 与ＣＤ８组相比，ｔ＝５．６７６８，Ｐ＜０．叭； 与ＣＤ４／ＣＤ８组相比， ｔ＝６．０２５１．Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ ＣＤ４表达量明显上升，而ＣＤ８表达量明显下降，从而使全血细 胞培养组ＣＤ４／ＣＤ８比值明显高于白细胞培养组的ＣＤ４／ＣＤ８ 比值．红细胞对ＣＤ４有正调控作用，而对ＣＤ８分子表达有负 ２．３原发－眭肝癌患者和正常人全血细胞培养组与白细胞培养组 调控作用（表１，表２），如何解释此种现象？Ａｒｏｓａ『ｌ１在体外将 ＣＤ４／ＣＤ８水平比较肝癌患者与正常人全血细胞培养组ＣＤ４ 鼠淋巴细胞培养加红细胞，再混合培养，发现有红细胞培养组Ｔ ・１２・ 临麻医学工程 ２０１１年１月第１８卷第１划 细胞亚群有变化，发现红细胞可增强Ｔ淋巴细胞活性，减少淋 组ＣＤ４／ＣＤ８比值也明显低于正常人白细胞培养组ＣＤ４／ＣＤ８ 巴细胞凋亡．Ｓｕｄａ［３１发现ＩＬ一７在体外淋巴细胞培养中可促使鼠 比值，这说明原发性肝癌患者ＣＤ４／ＣＤ８低下还有其它影响因 淋巴细胞从ＣＤ３＋，ＣＤ４＿转为ＣＤ３＋．ＣＤ４＋阳性细胞，表明Ｔ淋巴 素，值得深入研究。研究表明，我们开拓了红细胞凋控白细胞 细胞可以在体外因不同因素的作用，使Ｔ淋巴细胞亚群状态有 免疫功能的一种血细胞快速培养系统研究方法，这是系统血液 变化。Ｒｉｃａｒｄｏ １４１认为环胞霉素Ａ加到有红细胞的淋巴细胞培养 免疫学的一种新的研究领域，这种简单实用的医学免疫学实验 管液中．环胞霉素Ａ可阻碍红细胞的抗淋巴细胞代谢中的氧化 研究体系和医学工程系统．可开拓系统生物学和系统免疫学多 作用，使淋巴细胞凋亡加剧，故有抗细胞免疫排斥作用。有报 方面的研究课题，今后向国内推广应用。有深远的意义和价 道Ｉ５１重组人红细胞生成素使用。可改善血液患者的贫血状态， 使Ｔ淋巴细胞ＣＤ４／ＣＤ８比值上升．细胞免疫功能明显改善。 我们用人的新鲜抗凝血标本，通过短暂的血细胞快速培养 技术，采用系统免疫学和计算免疫学的方法，直接证明红细胞 次报道。我们的实验解决了动物细胞人工培养的繁琐性与间接 性验证的不足 ，用我们的实验培养体系可直接证明人红细胞 对人Ｔ淋巴细胞免疫功能的正调控作用。在实验设计中，如果 需要加入环胞霉素Ａ等药，直接证明环胞霉素Ａ等药对人红细 胞调控人Ｔ淋巴细胞能力的影响，可将０．２ ｍｌ生理盐水换成环 系也可用于中药免疫调节剂的实验研究［７１，而且实验培养条件 要求简单，不需无菌操作．不需另加抗菌素和人工营养液。我 们的血细胞快速培养体系为自身天然营养环境，可形成内在的 结果更符合人体内实验数据，可用于临床诊治参考。 我们的研究表明原发性肝癌患者红细胞调控ＣＤ４／ＣＤ８能 值，值得关注和重视ｌ ７ ｌ８ｊ。 参考文献 ［１］ Ａｒｏｓａ ＦＡ，Ｐｅｒｅｉｒａ ＣＦ，Ｆｏｎｓｅｃａ ＡＭ．Ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ａｓ，ｍｏｄｕｌａｔｏｒＳ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ『Ｊ］．Ｃｕｒｒ ｐｈａｒｎ Ｄｅｓ，２００４，１０（２）：１９１－２０１． 的存在可在体外促Ｔ细胞亚群ＣＤ４／ＣＤ８比值有改变，这是首 ［２］ 郭峰，钱宝华，花美仙．体外免疫原快速激活全细胞固有免疫反应 系统模式的应用［ｊＪ．中国医药生物技术，２０１０，５（１）：６４—６７． 【３】Ｓｕｄａ Ｔ，Ｚｌｏｔｎｉｋ九ＩＩ广７ ｍａｉｎｔａｉｎｓ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ＣＤ３一 ＣＤ４－ＣＤ８一ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ［Ｊ１．ＪＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９１，１４６ ｆ９）：３０６８－３０７３． ［４］ Ｒｉｃａｒｄｏ ＦＡ，Ｃ１６ｕｄｉａ Ｂ，Ｇｏｎｃａｌｏ Ｃ，ｅｔ ０１．Ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｅａｌＴｙ ｏｕｔ Ｔ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｂｉｏａｅｔｉｖｉｔｉｅｓ ｔｈａｔ ａｒｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｏ ｅｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ Ａ ｌ Ｊ１． ＩＩ Ｍｏｌ Ｌ Ｓｃｉ，２００９，６６（２０）：＇３３８７—３３９８． ５１ 陈学波，朱水娣，胡玉纹，等．重组人红细胞生成素对血液透析患者 胞霉素Ａ等药，即可完成研究目的。我们的血细胞培养实验体 ｆ免疫功能的影响【ＪＩ．实用医学杂志，２００８，２４（２０）：３５５４—３５５５． ［６］Ｌｅａｌ－Ｎｏｖａｌ ＳＲ，Ｍｕｎｏｚ－Ｇ６ｍｅｚ Ｍ，Ａｒｅｌｌａｎｏ Ｖ，ｅｌ ｏ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ Ｗａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｏｎ ＣＤ４ Ｔ－ｈｅｌｐｅｒ ｅｌｃｌｓ ｉｍｎｌｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｐａｆｉｅｎ￣ｉｍ・ ｄｅｒｇｏｉｎｇ ｅａｉｄｉａｃ ｓｕｒｇｅｒｙ【ＪＪ．ＪＳｕｒｇＲｅｓ，２０１０，１６４（１）：４３—４９． ｓｐｏｎｓｅ［Ｃ］．／／Ｓｃｈｍｉｄｔ ＲＤ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ２ Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃｏｎｇｒｅｓ￣ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ，２００９．Ｂｏｌｏｇｎａ Ｉｔａｌｙ：ＭＥＤＩＭＯＮＤ Ｉｎ－ ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，２００９：３６９－３７２． Ｇｕｏ Ｆ．Ａ ｎｅｗ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ：ｓｙｓｔｅｍｓ ｂｌｏｏｄ ｒａｐｉｄ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅ－ 信息互动网络体系，近似体内血循环信息网络状态，所得研究 ［７］力下降．这和肿瘤患者往往有贫血，红细胞功能有缺陷，红细 ［８］ 郭峰．浅谈开展中医药现代系统免疫学研究的重要性ｆＪ］．深圳中 胞的抗氧化等作用下降有关，另外原发性肝癌患者白细胞培养 ・西医结合杂志，２０１０，２０（１）：８－９． （责任编辑：常海庆） 摘要・ ｄｏｉ：１ ０．３９３６￣．ｉｓｓｎ．１ ６７４－４６５９．２０１ １．０１．０１ ２ 灭活大肠杆菌（菌苗）在银屑病新鲜血培养生命体系中激活和调控 ＣＤ５９分子表达和ＩＬ一１２／ＩＬ一１０比值的天然免疫实验性治疗研究 郭峰，张志勇，钱宝华，张军 （第二军医大学长海医院输血科血液免疫学研究室，上海２００４３３） 【摘要】 背景菌苗治疗银屑有效，但机制不清楚。目的利用系统免疫学新鲜＿ａ３４－；￣ｒ４￣式，研究菌苗在体外银屑病新鲜血短暂快速培 养物生命体系中能否调控ＣＤ５９分子表达和ＩＬ＿１２／ＩＬ Ｏ比值天然免疫实验胜对比治疗研究．目的是代替银屑病人体和动物模型天然免疫菌 苗治疗试验。方法２５例银屑病１５例正常人，新鲜血新鲜血培养实验组：０２ｍｌ（加热灭活）大肠杆菌（浓度６×１０ｓ悬液）加到０２ｍｌ枸橼 酸抗凝新鲜全血细胞悬液和０３ ｍｌ自身新鲜血浆中；新鲜血培养对照组：０２ ｍｌ生理盐水加到０２ ｍｌ枸橼酸抗凝新鲜全血细胞悬液和ｏ３ 自 身新鲜血浆中，混匀，３７ ｏＣ１小时，低速离心５分钟，两管红细胞ＣＤ５９表达水平（平均荧光强度）用ＦＩＴＣ一酶标抗ＣＤ５９单抗流式细胞 仪测定，新鲜血培养生命体中ＩＬ一１２和ＩＬ一１０水平（ｐｇ／ｍ￣）用抗ＩＬ一１２和ＩＬ＿１０免疫酶联常规法测定：红细胞激活率：实验组ＣＤ５９（或 ＩＬ＿１２或ＩＬｌ０或Ｉ卜１２／Ｉ卜１Ｏ）水平一对照组ＣＤ５９（或ＩＬ＿１２或ＩＬｌ０或Ｉ卜１２／Ｉ卜１Ｏ）水平。结果银屑病实验组对照组ＣＤ５９表达水平 分别为７４９．２７±１５１．３３和６５１．４４±１５２．３５，正常人实验组和对照组ＣＤ５９分别是５３３．６１±１７１．９９和４７５．１±１２４．９７．银屑病实验组ＣＤ５９明显 高于所有组别（Ｐ＜０．０５￣０．０１）；银屑病实验细对照组，正常人实验组对照组４组ＩＩ『１２分别是１５３±０．８３，２＿３２±２０３，１．６６±０．６９，１．２１±０．３０。 银屑病实验组ＩＬ＿１２值明显低于自身对照组和正常人实验组Ｐ＜３．０５－０．０１；４组ＩＬ＿１０水平分别是６１７±０．７５，４．８９±ＩＤ７，７．３８±１．５６，５．９１±０．９４， 银屑病实验组和正常人实验组Ｉ卜１０值都明显高于自身对照组值（Ｐ＜０．０１）；４组的ＩＬ＿１２／Ｉ卜１Ｏ比ｃ荭分别是：０２４８±１．１０６６。０．４７４４±１．８９７１． ０．２２４９±０．４４２３，０．２０４７±０．３１９１，银屑病实验组ｌ卜１２／ＩＬ一１ ０比值日月ｌ显低于自身对照组（Ｐ＜Ｏ．０５）。银屑病中菌苗对红细胞ＣＤ５９促进率为 ０．１５０１±０Ｄ０６７，略高于正常人菌苗对红细胞ＣＤ５９促进率（．００９８３±０３７６２）；银屑病中菌苗对ＩＬ一１２／ＩＬ＿１０促进率为负值（－０４７７２±０．４１６７） ．明显低于正常人促进率（０．０９８６８±０．３８６０），ｔ－６．４４４６，Ｐ＜０．０１。结论银屑病ＣＤ５９和ＩＬ一１２／ＩＬ＿１Ｏ值处高亢紊乱失控状态：菌苗可使银屑 病ＩＬ＿１２／ＩＬ一１ｏ比值下降，对病理性天然免疫炎症反应有负调控治疗价值，可在新鲜血生命体系中对系统免疫学机理深入研发与创新 【关键词】 菌苗；银屑病：ＩＬ一１２／ＩＬ一１０比值