理岱盟擅匡堂！Ｑ！呈生！圣旦箜至Ｑ鲞筮！！塑丛ＱＱ曼垦！Ｑ盟ｇＱ垦Ｑ壁！：望！！：兰Ｑ！至：∑Ｑ圣：呈Ｑ：盟Ｑ：！呈・２４５７・肝癌细胞内Ｓｏｘｌ７基因表达水平与细胞迁移、侵袭力的相关性研究黄子明１，张洪义２，赵刚２，李志杰２，肖军３，闫舫３，吕丽萍３ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇｅｎｅＳｏｘｌ７ａｎｄｔｈｅｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｏｎｐｏｗｅｒｏｆｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓＨＵＡＮＧＺｉｍｉｎ９１，ＺＨＡＮＧＨｏｎｇｙｉ２，ＺＨＡＯＧａｎ９２，ＬＩ１Ｚｈｉｊｉｅ２，ＸＩＡＯＪｕｎ３，ＹＡＮＦａｎ９３，ＬＶＬｉｐｉｎ９３ＴｈｅＰｏｓｔ—ＧｒａｄｕａｔｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＡｎｈｕｉＨｅＦｅｉ２３００３２，Ｃｈｉｎａ；２ＡｉｒＦｏｒｃｅＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆＣＰＬＡ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１４２，Ｃｈｉｎａ；’ＴｈｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＰＭ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１８２，Ｃｈｉｎａ．【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ｉｎｖａｓｉｏｎｐｏｗｅｒｍａｓａｙｓＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｔｈｅＳｏｘｌ７ａｎｄｃｅｉｌｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ｏｆｔｈｅｈｅｐａｔｏｍａｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓＱＳＧ７７０１ａｎｄｆｏｕｒｆｏｒｍｓｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃａｒｃｉｎｏ—ａｓ—ｃｅｌｌｓＬＭ３，ＭＨＣＣ一９７Ｌ，ＨｅｐＧ２，ＳＫ—Ｈｅｐ一１ｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．ＢｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆＲｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌａｎｄｓｃａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｇｅｎｅＳｏｘｌ７ａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｉｎｖａｓｉｏｎｔｏａｎｄｉｍｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｅｆｉｖｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｅｌｌｌｉｎｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ，ｗｅａｄｏｐｔｔｈｅＳｐｅａｒｍａｎ＇ｓｒａｎｋｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｐｒｅｓｓｉｏｎｃｏｍｐｌｅｔｅｔｈｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｅｘ—ｌｅｖｅｌｏｆＳｏｘｌ７ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｅｓｓｉｎＱＳＧ７７０１ｃｅｌｌｌｉｎｅｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ．ＴｈｅｒｅｅｘｉｓｔｅｄｎｅｇａｔｉｖｅｏｎｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＳｏｘｌ７ａｎｄｃｅｌｌｓ７ｉｍｍｉｇｒａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｓｃａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｒｅａ，ｃｅｌｌｓ７ｎｕｍｂｅｒａｎｓｗｅｌｌｃａｂｉｎｉｍｍｉ９１＿．ａｔｉｏｎＴｒ—ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＳｏｘｌ７ｗａｓｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｌｅｓｓａｎｄｃｅｌｌｓｉｎｖａｓｉｏｎｐｏｗｅｒ．ｐｒｏｔｅｉｎ；ｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎＭｏｄｅｒｎＯｎｅｏｌｏｇｙ２０１２，２０（１２）：２４５７—２４６０【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ；Ｓｏｘｌ；Ｃ］ＴＮ；ｃｏｒｔａｅｔｉｎ【摘要】目的：从基因表达水平上探讨肝肿瘤细胞内Ｓｏｘｌ７的ｍＲＮＡ表达量与细胞迁移、侵袭力的相关性。ＰＣＲ法检测细胞内Ｓｏｘｌ７、ＣＴＴＮ基因的ｍＲＮＡ表达水平，细胞划痕和Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室侵袭实验检测肝方法：收集４种肝肿瘤细胞ＨｅｐＧ２、ＭＨＣＣ一９７Ｌ、ＬＭ３、ＳＫ—Ｈｅｐ一１及一种非肿瘤肝上皮细胞ＱＳＧ７７０１，Ｒｅａｌ—Ｔｉｍｅ肿瘤细胞迁移、侵袭力。对Ｓｏｘｌ７基因的表达水平与ｃｒｌ３＂Ｎ的表达量及细胞划痕、Ｔｒｍａｓｗｅｌｌ小室侵袭的实验结果进行秩相关检验。结果：与非肿瘤细胞相比，肿瘤细胞内Ｓｏｘｌ７表达水平普遍较低，ＣＴｒＮ的表达水平较高；在４种肝肿瘤细胞中，Ｓｏｘｌ７基因的表达水平与ＣＴｒＮ的ｍＲＮＡ的表达水平及细胞划痕区域细胞生长速度、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室穿膜细胞数的统计结果呈负相关，秩相关系数ｔ＝一１。结论：肝肿瘤细胞内Ｓｏｘｌ７基因的表达水平的高低与细胞的迁移、侵袭力呈负相关。【关键词】肝肿瘤；Ｓｏｘｌ７；ＣＴＹＮ；ｃｏｒｔａｅｔｉｎ蛋白；细胞分化【中图分类号】Ｒ７３０．２３；Ｒ７３５．７【文献标识码】ＡＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—４９９２．２０１２．１２．０４Ｉ文章编号】１６７２—４９９２一（２０１２）１２—２４５７—０４ＳＲＹ—ｂｏｘｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｇｅｎｅ１７（Ｓｏｘｌ７）是一种与肝脏细胞皮层肌动蛋白（ｃｏｒｔａｃｔｉｎ）是一种微丝肌动蛋白结合蛋白，主要参与细胞骨架系统的调控，细胞黏附等过程；ＣＴｒＮ基因能够编码ｃｏｒｔａｅｔｉｎ蛋白，故ＣＴＹＮ基因的ｍＲＮＡ表达水平与肿瘤细胞的侵袭和转移相关Ｐ‘３１。有研究证实ＣＴＹＮ基因的高表达与肿瘤细胞的远处转移和肝癌的不良预后密切相关，目前医学上对Ｓｏｘｌ７基因表达水平的高低与肝肿瘤的细胞迁移及侵袭力之问的关系研究并不多见，本实验通过收集不同来源的肝细胞及肝肿瘤细胞来初步探讨两者之间的相关性。１材料与方法１．１材料分化相关的标记基因，在胚胎发育中必不可少，文献报道它能够通过下调ｗＮ可Ｂ通路的信号分子而抑制肿瘤的发生…。收稿日期修回日期基金项目２０１２一Ｕ，一１２２０１２一０６一１２国家科技支撑计划项目（编号：２０１２ＢＡｌｌ５８０８）１安徽医科大学研究生学院（空军临床学院），安徽合肥２３００３２２中国人民解放军空军总医院，北京１００１４２３中国人民解放军军事医学科学院，北京１００１８２作者单位【作者简介】黄子明（１９８７一），男，江苏淮安人，硕士在读，主要从事肝胆胰肿瘤研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｚｍ８７＠１２６．ＣＯ／２ｑＬＭ３细胞由中国人民解放军总医院肿瘤研究中心馈赠，ＨｅｐＧ２、ＱＳＧ７７０１细胞由军事医学科学院九所吕丽萍馈赠，ＭＨＣＣ９７Ｌ、ＳＫ—Ｈｅｐ一１细胞由军事医学科学院九所张瑞馈赠，Ｔｒｉｚｏｌ（Ａｍｂｉｏｎ公司），ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩｐｒｅｍｉｘＥｘ【通讯作者】张洪义（１９６３一），男，山东泰安人，主任医师，主要从事肝胆胰肿瘤微创治疗。Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｈｙｉｙｉｌ４８７＠１６３．Ｔａｑ１Ｉ万方数据・２４５８・重王盟：笠ｓｙｓｔｅｍＢ王疸绳胞凼曼！！！！基固盍达壅垩皇绁塑适整！堡苤应的担羞壁盟童细胞，９０％乙醇固定、１％的结晶紫染色，光学显微镜下观察，随机取５个高倍视野并照相，记录穿膜细胞数。１．２．３细胞划痕实验胰酶消化各Ｃｏｍｉｎｇ细胞培养瓶内的细胞，加入ＤＭＥＭ培养基，并将细胞浓度调至１×１０６个／ｍｌ，将各细胞悬液分别接种至６孔板各孔内，待细胞贴壁面积达９０％左右时，弃去瓶内陈旧培养基，ＰＢＳ洗涤贴壁细胞２次，并加入１ｍｌ新鲜的高糖ＤＭＥＭ培养基，以１ｍｌ枪头在孔内划线，显微镜下拍摄划线区域细胞生长状态，以后每隔２４小时拍摄一次，ＷＣＩＦＩｍａｇｅ（ＴａＫａＲａ，ＤＲＲ０８１Ａ）．ＰＣＲ２７００（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｒｍｓ公司），ｓｔｅｐｏｎｅｐｌｕｓ实时定量ＰＣＲ仪（ＡＢＩ公司），Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室购自Ｃｏｍｉｎｇ公司（２４孔板１２嵌套）。１．２实验方法１．２．１Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ①：Ｔｒｉｚｏｌ法提取细胞总ＲＮＡ，测定ＯＤ２６０／ＯＤ２８０值，电泳检测ＲＮＡ质量。②：ＣｑＴＮ、Ｓｏｘｌ７、ＧＡＰＤＨ基因的引物设计：ＣＴＴＮ基因：Ｆｏｒｗａｒｄ：５’一ｔｇａｇｔｇｔｇｔ—ｇｔｔｃｔｔｃｃｅｃａａｇ一３’，Ｒｅｖｅｒｓｅ：５７一ｃａｃｇｔｇａｃｃｔｔｃｔｇｇａａａｇａｃａ一３“４１；ＳＯＸｌ７基因：Ｆｏｒｗａｒｄ：５’一ｇｇａｃｃｇｃａｃｇｇａａｔｔｔｇ一３’，Ｒｅｖｅｒｓｅ：５’一ｇａｇｇｃｃｃａｔｃｔｃａｇｇｃｔｔｇ一３Ｊ软件分析空白区域面积。７；ＧＡＰＤＨ基因：Ｆｏｒｗａｒｄ：５’一ｃａｔｇａｇａａｇ—１．３统计学处理Ｓｏｘｌ７ｍＲＮＡ表达水平与ＣＴＦＮｍＲＮＡ表达量、Ｓｏｘｌ７ｍＲＮＡ表达水平与肝癌细胞的迁移能力和侵袭能力之间的相关性采用秩相关统计学方法进行数据分析，秩相关系数公ｔａｔｇａｃａａｃａｇｃｃｔ一３７，Ｒｅｖｅｒｓｅ：５７一ａ殍ｃｃｔｔｃｃａｃｇａｔａｃｃａａａ殍一３’。③：ＲＴ—ＰＣＲ法扩增ＣＴｒＮ、Ｓｏｘｌ７、ＧＡＰＤＨ基因片段。ａ：ＲＴ反应：分别用Ｓｏｘｌ７、ＣＴｒＮ、引物反转录为ｃＤＮＡｌ０１ｘｌ，反应条件：２５０ＣｌＯｍｉｎ，３７℃ｌＯｍｉｎ；ＲＴａｓｅ失活，８５℃５ｍｉｎ。ｂ：扩增后进行１．５％琼脂糖凝胶电泳。④：以５株细胞中ＣＴｒＮ、Ｓｏｘｌ７、ＧＡＰＤＨ基因的ｃＤＮＡ溶液为模板进行Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ反应，ＧＡＰＤＨ为内参基因，ＱＳＧ７７０１细胞为内参细胞。Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ式：ｒ。＝—兰！兰二，ＳＰＳＳｌ７软件进行秩相关分析与制图。．，／ＩｑｑＩｐｐＴ一一２结果２．１５株细胞Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ反应结果４株肝癌细胞内Ｓｏｘｌ７基因的ｍＲＮＡ表达水平显著低于ＰＣＲ体系２０１ｘｌ，其中ＰｒｅｍｉｘＳＹＢＲ１０１ｘｌ，ＣＤＮＡ模版１Ｉｘｌ，反应结束后进行相对基因拷贝数的扩增曲线分析。反应程序为９５℃２０ｓ；９５。Ｃ５ｓ，５８℃２０ｓ，７２℃１２ｓ（４０ｃｙｃｌｅ）；９５℃１５ｓ．６０ｃＣ１ｍｉｎ，０．３℃１ｍｉｎ，９５℃１５ｓ。１．２．２肝脏上皮细胞ＱＳＧ７７０１（Ｐ＜０．０５）；除了ＳＫ—Ｈｅｐ一１细胞，肝癌细胞中的ＣＴｒＮｍＲＮＡ表达水平显著高于肝脏上皮细胞（Ｐ＜０．０５，图１）。４株肝癌细胞中Ｓｏｘｌ７与ＣＴＴＮ的ｍＲ—ＮＡ表达量水平呈负相关（图２Ａ），秩相关检验结果为：０＝一１。将ＲＴ—ＰＣＲ的反应产物进行琼脂糖电泳，内参ＣＡＰ—ＤＨ条带的亮度一致，ＱＳＧ７７０１、ＨｅｐＧ２、ＬＭ３、ＳＫ—Ｈｅｐ一１、ＭＨＣＣ９７ＬＴｒａｎｓｗｅｌｌ小室侵袭实验以无血清的ＤＭＥＭ培养基过夜培养肝（癌）细胞，２４小时的饥饿处理后，向Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室的上室内加入１００１ｘｌ的无血清培养基，下室加入６００ｔｘｌ含１０％新生牛血清的ＤＭＥＭ培养液，置于３７℃、ＣＯ：体积分数为５％的培养箱中孵育１ｈ，细胞浓度５×１０’个／ｍｌ接种于上室，于培养箱中培养２４ｈ，用棉签轻拭小室内的Ｍａｔｒｉｇｅｌ和Ａ５株细胞系中Ｓｏｘｌ７的条带呈逐步变暗，而ＣＴＴＮ的条带大致上逐步增亮（图３）。Ｂ２・５２．０１星１．５呈吃【ｓ—１１雪１．０Ｏ．５０．０ｔｔ∞笛如＂∞巧如＂∞筋ＨｅｐＧ２圉ＨｅｐＧ２霪ＬＭ３凰１－ＬＭ３ＭＨＣＣ９７ＬＱＳＧ７７０１ＳＫ—Ｈｅｐ－ｌＭＨＣＣ９７ＬＱＳＧ７７０１ＳＫ－Ｈｅｐ一１图１Ｆｉｇ．１Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ相对定量法检测Ｓｏｘｔｏ１７ｍＲＮＡ（Ａ）和ＣＴＦＮｍＲＮＡ（Ｂ）表达的荧光值（ＲＱ）对数ｍＲＮＡ（Ａ）ａｎｄＣＴＦＮｍＲＶＮＡ（Ｂ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＲｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲａｎａｌｙｚｅｓｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｖａｌｕｅｏｆＳｏｘｌ７２．２Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室侵袭实验Ｃｅｌｌ３讨论ｃｏｕｎｔｅｒ软件统计５株细胞穿膜数，ＨｃｐＧ２、ＬＭ３、Ｓｏｘｌ７基因是高迁移率组转录因子超家族的一员，他与人类胚胎干细胞发育、分化密切相关。目前对Ｓｏｘｌ７基因功能的研究更多集中在肿瘤细胞的增殖和进展等方面，Ｙａｎ—Ｗｅｉ∞Ｊ等报道了Ｓｏｘｌ７基因能够通过抑制细胞周期蛋白Ｄ１来调节胃癌细胞的增殖。ＣＴＦＮ基因能够编码ｃｏｒｔａｃｔｉｎ蛋白，即丝状肌动蛋白的结合蛋白。该基因位于染色体１１ｑ１３，该区域在肝肿瘤组织中存在扩增，并且ＣＴＴＮ基因的扩增以及ｍＲＮＡ的超表达与肿瘤的转移和不良预后相关。４。，因此通过检测ＣＴＦＮ基因ｍＲＮＡ的表达水平可反应肿瘤细胞的侵袭能力，本实验Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＭＨＣＣ９７Ｌ、ＱＳＧ７７０１、ＳＫ—Ｈｅｐ一１的统计值分别为１５．０±１．４、２０．６±２．５、１０４，６±２．６、１４０．６４－４．３、４１，２±２．９（图４—５）。４株肝癌细胞中Ｓｏｘｌ７与穿膜细胞数的秩相关检验结果为：Ｌ＝一１（图２Ｂ）。２．３细胞划痕实验ＷＣＩＦＩｍａｇｅＪ软件分析细胞划痕区域的细胞扩增速度，统计９６小时后空白区域占原始划痕区域面积的百分比。５株细胞ＱＳＧ７７０１、ＭＨＣＣ９７Ｌ、ＨｅｐＧ２、ＬＭ３、ＳＫ—Ｈｅｐ一１测得结果分别为９５％、９０％、３２％、１０％、７５％（图６—７）。细胞内Ｓｏｘｌ７的ｍＲＮＡ含量与细胞迁移能力的秩相关检验结果为：ｔ＝一１（图２Ｃ）。ＰＣＲ结果显示，４种肝肿瘤细胞内ＣＴＩ＇Ｎ的ｍＲＮＡ表达水平显著高于非肿瘤细胞（ＳＫ—Ｈｅｐ一１细胞除外）。万方数据塑岱胜擅送堂！Ｑ！兰堡！兰爿箜兰Ｑ鲞笙！圣翅丛Ｑ望垦基盥Ｑ堕垦Ｑ煦鱼羔：望塑：至Ｑ！至：ｙＱ坠兰Ｑ：盟Ｑ：！兰・２４５９・１．０１．５２．０２．５３．０３．５４．０Ｓｏｘｌ７ｍＲＮＡ图２．ｃｏｘｌ７的ｍＲＮＡ表达水平与ＣＩＴＩ＇Ｎ的ｍＲＮＡ表达量（Ａ）、Ｔｍｎｓｗｅｌｌ小室穿膜细胞数（Ｂ）、划痕区细胞生长速度（ｃ）的秩相关检验散点图Ｆｉｇ．２ＲａｎｋｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＳｏｘｌ７ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｔｉｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｃｌＴｒＮｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（Ａ），ｉｎｖａｓｉｖｅｐｏｗｅｒ（Ｂ），ｃｅｌｌｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ（Ｃ）．鱼垒旦望旦竺！！盟ｋｂ２０００１０００７５０５００２５０１００２３４５２３４５图３肝（癌）细胞内Ｃ７ＩＴｒＮ、Ｓｏｘｌ７、ＧＡＰＤＨ基因扩增后的琼脂糖电泳图Ｆｉｇ．３ＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆＣＴＩ’Ｎ，Ｓｏｘｌ７，ＧＡＰＤＨｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｆｉｖｅｃｅｌｌｌｉｎｅｓｌ：ＱＳＧ７７０１；２：ＨｅｐＧ２；３：ＬＭ３；４：ＳＫ—Ｈｅｐ—Ｉ；５：ＭＩＣＣ９７Ｌ．斓黧毒图４Ｆｉｇ．４Ｔａｎｓｗｅｌｌ小室侵袭实验穿膜细胞（结晶紫染色×１００）ａｓｓａｙ（Ｃｒｙｓｔａｌｖｉｏｌｅｔ×１００）ＤｅｃｏｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｕｎｃｔｕｒｅｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅＴｒａｎｓｗｅｌｌ＾Ｃ系内的Ｓｏｘｌ７基因的ｍＲＮＡ表达水平普遍较低，提示Ｓｏｘｌ７基因表达的水平的下降与肿瘤的发生相关。ＹａｎＪｉａ悼１等对３２例肝癌标本及８例癌旁组织标本进行Ｓｏｘｉ７基因的超甲基化进行＿ｒ检验，发现１９／３２例标本中肝癌细胞内的Ｓｏｘｌ７基因发生超甲基化，８例癌旁组织中未发现超甲基化现象，他们认为，Ｓｏｘｌ７基因通过超甲基化来调节自身的表达水平。ＷｅｉＺｈａｎｇ６１等对结肠癌细胞内ＣｐＧ岛甲基化的整体分一兰面Ｕ２皇ＵＣｊ厶ｏｏＥｊＺ析中也发现，Ｓｏｘｌ７基因表达的下调是通过启动区域发生超甲基化实现的，在结肠癌所有标本中，甲基化依赖的Ｓｏｘｌ７图５Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室侵袭实验统计分析ａ＆ｓａｙ基凶下调发，扛率高达１００％。同时经过重组Ｓｏｘｌ７基因的质粒转染结肠癌细胞，其细胞的克隆形成率明显下降，而且与肿瘤发，丰－相关的重要信号通路一Ｗｎｔ信号通路明昆受抑制，这一发现进一步肯定了Ｓｏｘｌ７基因对肿瘤的抑制作用，现已有研究报道Ｓｏｘｌ７的过表达可以肩动ＥＳＣ的分化，在发育初期可诱导原始内胚层的分化，随后还能促进向终末内胚层的分化“，因此Ｓｏｘｌ７基因目前被公认为与肝细胞分化密切相关的标记基因。Ｆｉｇ．５ＴｈｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｄａｔａｏｆｔｈｅｃｅｌｌｓａｃｒｏｓｓｅｄｔｈｅＴｒａｎｓｗｅｌｌ在肿瘤学ｊ：，分化越好的细胞Ｊ￡恶性程度越低，本实验通过检测各细胞系内ＣＩＴＮ基因ｍＲＮＡ的相对拷贝数以及细胞划痕、细胞侵袭实验来探讨Ｓｏｘｌ７与肿瘤细胞的迁移、侵袭能力之间的相关性。』∈收集４种肝肿瘤细胞及一种肝脏上皮细胞，通过Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ检测各细胞系Ｓｏｘｌ７的ｍＲＮＡ表达最，结果发现，相对于非肿瘤细胞，４种肿瘤细胞万方数据董±四：笠月王癣绁堕凼兰！！！Ｚ基围盍达坐垩兰绁堕迤整！缝袭出的担苤世婴童图６各种细胞划痕区的生长状况（×５０）Ｆｉｇ６Ｏｕｔｃｏｍｅｏｆｃｅｌｌｓｃａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｓｔ（×５０）加关系．还需更为合理的实验设计，不仅需要在细胞水平Ｉ：榆∞测两者的相关性，还应收集临床上的肝癌标本，将Ｓｏｘｌ７缺∞因的表达水平与肝癌患者的预后判断密切的结合起米。∞【参考文献】［１］ＫｉｍＭ，ＬｅｅＨＣ，Ｔｓｅｄｅｎｓｏｄｎｏｍ０，ｅｔａ１．Ｆｕｎｅｔｉｎｎａｌｉｎｔｅｒａｔ’ｔｉｏｎ∞ｂｅｔｗｅｅｎＷｎｔ３ａｎｄＦｒｉｚｚｌｅｄ一７ｌｅａｄｓｔｏａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＷｎｔ／ｂｅｔａ加—ｅａｔｅｎｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｔｍｌａＩ・ｅｌｌｓ：Ｊ］．０ＪＨｅｐａｔｏｌ，２００８，４８：７８０—７９１．０２４４８７２９６［２］ＧｉｂｃｕｓＪＨ，ＭａｓｔｉｋＭＦ，ＭｅｎｋｅｍａＬ，ｅｌａ１．ＣｏｒｔａｃｔｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＧｒｏｗｔｈｔｉｍｅ（ｈｏｕｒｓ）ｐｒｅｄｉｃｔｓｐｏｏｒｓｕｒｖｉｖａｌｉｎｌａｒｙｎｇｅＭｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＢｒＪＣａｎ，２００８．图７划痕区域细胞生长面积的变化９８（５）：９５０—９５５．Ｆｉｇ．７Ｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｆｙｏｆｃｅｌｌｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｓｃａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｒｅａ［３］Ｙａｎ—ＷｅｉＹｅ，Ｊｉａｎｇ—ＨｏｎｇＷｕ，Ｃｈｕｎ—ＭｅｎｇＷａｎｇ．ｅｔａ１．肿瘤细胞的分化程度与恶性程度呈反比关系，这一点住Ｓｏｘｌ７ｒｅｇｕｌａｔｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｕｒｉｎｇｇａｓｔｒｉｃｃａｎ（’ｅｒ本实验中也得到了证实，本实验通过Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ检测得ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔ，２０１１，３：１２４—１３１．出在４株肝癌细胞系中Ｓｏｘｌ７的表达量由低到高分别是『４］ＷｅａｖｅｒＡＭ．Ｃｏｒｔａｃｔｉｎｉｎｔｕｍｏｒｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒ，ＭＨＣＣ９７Ｌ、ＳＫ—Ｈｅｐ一１、ＨｅｐＧ２、ＬＭ３，而ＣＴｒＮ基因的表达２００８．２６５（２）：１５７—１６６．蹙水平、细胞迁移率、细胞侵袭力在这几株细胞中却逐级降［５］ＹａｎＪｉａ，ＹｕｎｓｈｅｎｇＹａｎｇ，ＳｈｕａｎｇＬｉｕ，ｅｔａ１．Ｓｏｘｌ７ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓＷＮ低。通过秩相关检验，得出Ｓｏｘｌ７基因在肝癌细胞中的表达７１＂／［３一ｃａｔｅｎｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｈｅｐａｔｏｏｅｌｌｕｌａｒｃａｒ【ｑｎｏｍａ［Ｊ］．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０１０，５（８）：７４３—７４９．水平与肝癌细胞的迁移率、侵袭力呈负相关，这项研究结果［６］ＷｅｉＺｈａｎｇ，ＳａｂｉｎｅＣ，Ｇｌｉｊｃｋｎｅｒ，ｅｔａ１．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆ提，Ｊ：，Ｓｏｘｌ７基因的表达水平可能作为ＨＮＳＣＣ疾病进展和观ｔｈｅｃａｎｏｎｉｃａｌｗｎｔａｎｔａｇｏｎｉｓｔＳＲＹ——Ｂｏｘｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｇｅｎｅ１７ｉｎｃｏｌｏ—测预后的一项指标和可能的治疗靶点，具有临床应用价值。ｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００８，６８：２７６４—２７７２．以往的文献对于Ｓｏｘｌ７基因与ＣＴｒＮ基因两者之间的功［７］ＳｈｉｍｏｄａＭ，Ｋａｎａｉ—ＡｚｕｍａＭ，ＨａｒａＫ，ｅｔａ１．Ｓｏｘｌ７［，ｌａｙｓａｓｕｂ—能关系尚未有提及，我们希望在本实验的基础上，找到两者ｓｔａｎｔｉａｌｒｏｌｅｉｎｌａｔｅ—－ｓｔａｇｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｅｍｂｒｙｏｎｉｅｅｌｌ—与肿瘤通路上的联系纽带。通过国内外的资料查寻，我们发ｄｏｄｅｒｍｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＪＣｅｌｌＳｃｉ，２００７，１２０：３８５９—３８６９．现，Ｓｏｘｌ７基因的过表达可通过抑制（Ｗｎｔ）／１３一ｃａｔｅｎｉｎ通路［８］ＯｉｓｈｉＹ，ＷａｔａｎａｂｅＹ，ＹｏｓｈｉｄａＹ．ＨｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｆＳｏｘｌ７来抑制肿瘤细胞的发生¨ｌ，而在ＹａｍａｄａＳ等人的研究中发ｇｅｎｅｉｓｕｓｅｆｕｌａｓａｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｅａｒｌｙｇａｓｔｒｉｃ现，通过基因沉默ＣＴＦＮ基因，细胞内Ｂ—ｃａｔｅｎｉｎ的表达量显ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＴｕｍｏｕｒＢｉｏｌ，２０１２，３３（２）：３８３—３９３．著下调一ｌ，这两项研究给我们一个提示，在肿瘤发生的通路［９］ＹａｎａｍｏｔｏＳ。ＫａｗａｓａｋｉＧ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｒｔａｃｔｉｎｉｎｃｒｅａｓｅｓｉｎ—ｖａｓｉｏｎ上，Ｂ—ｃａｔｅｎｉｎ可能成为这两个基因功能之间的桥梁。ｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｎｏｒａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＰａｔｈｏｌＯｎｅｏｌ肝癌细胞的迁移率、侵袭力是受诸多冈素影响的，为了Ｒｅｓ，２０１０，１６（４）：５２３—５３１，（编校：张志明）能够更好的研究Ｓｏｘｌ７基因与肿瘤细胞的迁移率、侵袭力的万方数据