万 方数据第７期刘高强等：昆虫杆状病毒表达系统的研究与应用进展４１２昆虫杆状病毒系统表达外源基因的新进展２．１杆状病毒载体及其表达系统进展昆虫杆状病毒表达系统进行外源基因表达时，存在的一个问题是筛选带有外源基因的重组病毒的效率较低（最初仅０．１％．１％），而且产物较难纯化。为此，人们设计了各种方法来改进病毒载体，如ＮＰＶＤＮＡ线性化，体外定点酶促重组，以及酵母选获得了既可感染家蚕又可感染秋粘虫细胞Ｓｆ－２１的宿主域扩大的昆虫杆状病毒表达载体（ＨｙＢａｃＰＡＫ６），它与含植酸酶基因的转移载体Ｐｖｌｌ３９３ｐｈｙ在家蚕细胞中的重组率达９０％以上。此外，Ｂａｃ—ｔｏ，Ｂａｃ表达系统是效率很高的表达系统，它利用穿梭质粒ｂａｃｍｉｄ在大肠杆菌中高效复制后，再提纯用于转染昆虫细胞，大大缩短了时间ｎ引。王汉中等呦３根据Ｂａｃ—ｔｏ．Ｂａｃ表达系统的基本原理，也构建了一种新颖的棉铃虫单粒包埋核多角体病毒表达系统（ＨａＢａｃ．ｔｏ．Ｂａｃ）。该系统中供体质粒ｐＦａｓｔＰｈＰｌ０中插入了带有多角体启动子序列的完整的多角体蛋白基因，因而多角体蛋白基因的表达和包涵体的形成也可作为转染成功的重要识别标记等，这是商品化的ＡｃＢａｃ．ｔｏ．Ｂａｃ系统所不具备的。目前可被应用于昆虫杆状病毒表达系统的细胞系较多，但应用较多的细胞系是秋粘虫Ｓ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ卵巢组织的细胞系ｓｆ－９，以及家蚕细胞系。洪华珠等拉叫建立了一株高水平表达重组蛋白的昆虫细胞系ＨＮＵ．Ｔｎ．ＦＢｌ。它是粉纹夜蛾Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ一昆虫细胞和大肠杆菌．昆虫细胞的穿梭载体的开发等¨６｜。其中Ｐｏｓｓｅｅ等设计的重组．救活可线性化ＡｃＮＰＶ病毒载体ＢａｃＰＡＫ６的重组效率较高，高达８０％以上，具有重要的应用价值¨７｜。该重组技术的基本原理为¨…：先找一个在ＡｃＭＮＰＶ基因组中不存在的Ｂｓｕ３６Ｉ酶切位点，采用体外突变，在多角体基因两侧的非必需基因ＯＲＦ６０３基因和必需基因ＯＲＦｌ６２９基因中各引入一个Ｂｓｕ３６Ｉ位点，然后通过重组将突变了的由ＯＲＦ６０３基因、多角体基因启动子控制的半乳糖苷酶基因、ＯＲＦｌ６２９基因引入ＡｅＮＰＶ基因组，获得重组病毒载体ＢａｃＰＡＫ６。（ＢａｃＰＡＫ６）ＤＮＡ经Ｂｓｕ３６Ｉ酶切而破坏了必需基因ＯＢＦｌ６２９，因而靠自身环化不能成活，必须与携带多角体蛋白基因启动子控制的外源基因和ＯＢＦｌ６２９基因的转移载体发生重组，病毒才能复制而救活，因此，该法的重组率很高。这一系统现已扩展到了ＢｍＮＰＶ表达系统。易咏竹等¨副通过克隆的家蚕核多角体病毒解螺旋基因ＤＮＡ，与重组救活可线性化的苜蓿尺蠖核多角体病毒基因工程载体病毒（ＢａｃＰＡＫ６）ＤＮＡ在昆虫细胞中发生重组，经累代筛ｎｉ脂肪体的传代细胞系。在辅以５％胎牛血清的商品无血清培养基Ｅｘｃｅｌｌ４００中，该细胞群体的倍增时间为２２．９ｈ，最高密度可达２．２１０６／ｍｌ，表达由ＡｃＭＮＰＶ构建的重组８．半乳糖苷酶的水平达（２２５．５－１－１３．４）ＩＵ／ｍｌ。该细胞系在表达重组蛋白方面与目前商业上最好的“高五”细胞（ＢＴＩ．Ｔｎ．５８１—４）相当，是一株很有价值的细胞系，具有广阔的应用前景。万方数据 ４２中国生物工程杂志第２４卷另外，一些影响杆状病毒系统表达外源基因产物的因素在近两年得到了研究。杆状病毒吸附宿主细胞的动力学参数是影响细胞感染效果和表达物产量的因素之一。Ｐｅｔｒｉｃｅｖｉｃｈ等旧１以表达轮状病毒的重组蛋白ＶＰ４为例，对病毒吸附动力学的参数进行了研究，发现影响细胞感染效果的主要参数是胎牛血清浓度。不用胎牛血清或经高温处理后再使用，反而可以获得更高浓度的表达产物。重组病毒感染ｓｆ－９的效果与细胞周期有关，Ｓａｉｔｏ等心３ｏ对ＧＦＰｕｖ基因在杆状病毒系统中表达的研究表明，当在宿主细胞的Ｇ．期感染时，细胞内的荧光强度是在Ｇ２／Ｍ期感染的１．３倍，同时在宿主细胞的Ｇ。／Ｓ期感染时，感染量是在Ｇ２／Ｍ期感染的１．５—１．８倍。该研究结果对于选择病毒感染宿主细胞的时期有一定的借鉴意义。Ｏｌｅｊｎｉｋ等Ⅲｏ讨论了高渗透压对昆虫细胞表达重组蛋白产量的影响。采用补料分批培养发现，ＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎｉＢＴＩ．ＴＮ．５８１．４（Ｔｎ一５）细胞具有很强的耐高渗透压能力，表达的重组核蛋白产量比等渗环境下的高出７２％。该结果对于提高重组蛋白的产量具有重要意义，可能的原因是高渗透压下，葡萄糖的比耗率增加，细胞内重组蛋白的合成代谢更加旺盛。另外，杆状病毒易被紫外线钝化，Ｄｕｓｔｉｎ等滔１将海藻病毒的嘧啶特殊二聚物糖基化酶（ＣＶ．ＰＤＧ）用杆状病毒（ＡｃＭＮＰＶ）表达后，发现重组ＡｃＭＮＰＶ受紫外线钝化的影响比野生型降低了３倍。该研究为提高杆状病毒抗紫外线能力提供了一个可行的办法。２．２杆状病毒表达系统的最新应用杆状病毒表达系统由于对外源基因克隆容量大，重组病毒易于筛选，具有完备的翻译后加工修饰系统和高效表达外源基因的能力等特点，现已广泛用于一些在其它表达系统表达有困难的高价值蛋白质的表达。新近报道的如人骨骼肌基因突变而产生的ａ一辅肌动蛋白，一直未找到较好的系统来表达它。Ａｋｋａｆｉ等∞３首次采用杆状病毒系统实现了它的高效表达和纯化。钙运转调节肽（ｃａｌｔｒｉｎ）在动物授精过程中可以抑制钙流入精子，避免过早地产生顶体反应而导致授精失败。目前获取它的唯一方法是从动物体内提取，但如能通过生物技术手段大量生产，无疑具有广阔的应用前景。Ｐｈａｎ等旧１首次用昆虫杆状病毒系统高效表达了ｃａｌｔｒｉｎ，并筛选出了有效的纯化方案。新近用杆状病毒表达系统表达成功的其它一些高价值蛋白见表２。表２利用杆状病毒系统成功表达的蛋白质３昆虫杆状病毒系统的应用展望由于昆虫杆状病毒表达系统独特的性质，现已被广泛应用于药物研发、疫苗生产、重组病毒杀虫剂等众多领域中。来ｍ３，现估计有近千种外源基因在该系统中得到表达。其中大部分表达产物是具较大潜力的高价值的药用物质。型多龛嚣耋。羔鬻：炙三竿萎霎篆万方数据 第７期刘高强等：昆虫杆状病毒表达系统的研究与应用进展４３近几年的研究发现，ＡｃＮＰＶ病毒也可以将外源基因导入哺乳动物的细胞，如人的肝细胞。这意味着ＡｃＮＰＶ病毒可能成为哺乳动物基因治疗的媒介载体¨３Ｉ，因此杆状病毒有望在未来人类的基因治疗中得到应用。另一方面，利用昆虫杆状病毒系统进行重组杆状病毒杀虫剂的研究也仍然具有十分重要的意义。由于昆虫杆状病毒对人、畜安全，不易引起广泛规模的生态平衡的破坏等特点，昆虫病毒杀虫剂已成为当今生物农药研究与开发的热点。但野生型杆状病毒有必要进行重组改造，因其杀虫速度较慢。此外，昆虫杆状病毒系统本身及其相关技术尚需进一步完善和提高。如该系统无法进行连续性表达；糖基化方式与哺乳动物细胞存在一定差异，糖侧链甘露糖的成分较高，而复合寡糖缺乏。在杆状病毒系统的基础研究和应用技术方面，目前杆状病毒的基因组学，特别是功能基因组学的研究相对薄弱，有关病毒晚期基因的高表达和调控机制等仍不明了。另外，杆状病毒可能的其它宿主还不十分清楚旧４｜，表达产物的纯化和多元表达等方面的技术还不够理想等¨５｜，都需要今后进一步研究。当前应重点加强杆状病毒的基因组学，特别是功能基因组学的深人研究，一是有助于杆状病毒载体的进一步改良，二是随着一些调节外源蛋白表达的基因结构和功能的深入了解，有利于外源基因的高效表达和调控。参考文献［１］ＰｏｓｓｅｅＲＤ．Ｂａｃｕｌｏｖｉｍｓｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓ．ＣｕｒｔＯｐｉｎＢｉｏｔｅｃｈ，１９９７，８：５６９—５７２［２］孙国勋，丁翠，蔡秀玉．杆状病毒的结构蛋白及其功能．昆虫学报，２００１，４４（３）：３６６。３７１【３］ＡｙｒｅｓＭＤ，ＨｏｗａｒｄＳＣ，Ｋｕ卫ｉｏＪ，ｅｔａ１．ＴｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ．Ｖｉｍｌｏ醪，１９９４，２０２：５８６—６０５［４］ＧｏｍｉＳ，ＭａｊｉｍａＫ，ＭａｅｄａＳ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｇｅｎｏｍｅｏｆ踟Ⅳ岍Ｊｍｏｄｎｕｃｌｅｏｐｅｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ．ＪＧｅｎＶｉｒｏｌ，１９９９，８０：１３２３～１３３７［５］ＡｈｒｅｍＣＨ，ＲｕｓｓｅｌｌＲＬＱ，ＦｕｎｋＣＪ，ｅｔａ１．ＴｈｅｆｌＫＩｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅＯｆｓｙｊｏｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｔａｍｕｌｔｉｎｕｅｌｅｏｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓｇｅｎｏｍｅ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９７，２２９：３８１—３９９［６］ＫｕｚｉｏＪ。ＰｅａｒｓｏｎＭＮ，ＨａｒｗｏｏｄＳＨ．ＳｅｑｕｅｎｃｅａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｇｅｎｏｍｅｏｆｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｏｒＬｙｍａｎｔｒ／ａｄ／ｓｐａｒ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９９。２５３（１）：１７—３４［７］ＩｊｋｅｌＷＦ，ｖａｎＳｔｒｉｅｎＥＡ，ＨｅｌｄｅｎｓＪＧ。ｅｔａ１．Ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄ万 方数据ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｅｘｉｇｕａｍｕｈｉｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅｏｐｅｌｙｈｏｄｒｏｖｉｒｕｓｇｅｎｅｏｍｅ．ＪＧｅｎＶｉｒｏｌ，１９９９，８０：３２８９—３３０４［８］ＣｈｅｎＸ，ＬｉｋｅｌＷＦ，ＴａｒｅｈｉｎｉＲ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅｆｔｅｌｉｃｏｖｅｒｐａａｒｍｉｇｅｒａｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｅｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｃｄｒｏｖｉｍｓｇｅｎｏｍｅ．ＪＧｅｎＶｉｒａｌ，２００１，８２：２４１～２５７［９］王利华，余健秀，胡晓晖，等．斜纹夜蛾核型多角体病毒ＢａｍＨｌ—Ｊ片段序列分析．生物化学与生物物理学报，２００１，３３（６）：６１５—６２０［１０］黎路林．杆状病毒表达载体系统．武汉：华中师范大学出版社．１９９６．１１—３０［１１］王文兵，张志芳，何家禄，等．杆状病毒基因组ＤＮＡ复制相关基因的研究进展．生物化学与生物物理进展，２０００，２７（３）：２５７—２６１［１２］彭建新．杆状病毒分子生物学．武汉：华中师范大学出版社，２０００．３２—８４［１３］张传溪，武家才．棉铃虫核型多角体病毒基因组结构及Ｄ１０基因．生物化学与生物物理学报，２００１，３３（２）：１７９～１８４［１４］周亚竟，易咏竹，张志芳，等．杆状病毒囊膜糖蛋白ｓｐ６４基因启动子活性分析．生物化学与生物物理学报，２００３，３５（１）：１８～２６［１５］ＣａｒｓｔｅｎｓＥＢ，ＪｉａｎＬＪ，ＤｏｍｉｎｙＣ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＣｆＭＮＰＶｅａｒｌｙｇｅｎｅｓ：／ｅ－１，／ｅ－２ａｎｄｐｃ３８．ＶｉｒｕｓＲｅｓ，２００２，８３（１－２）：１３～３０［１６］ＪｏｎｅｓＩ，ＭｏｒｉｋａｗａＹ．Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｆｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｓ．ＣｕｒｔＯｐｉｎＢｉｏｔｅｃｈ，１９９６，７（５）：５１２—５１６【１７ＪＫｉｔｔｓＰＡ，ＰｏｓｓｅｅＲＤ．Ａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｐｒｏｄｕｃｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓｈｉｇｌｌｆｒｅｑｕｅｎｃｙ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９３，１４：８１０～８１７［１８］易咏竹，陈寅，张志芳。等．宿主域扩大的重组救活昆虫杆状病毒表达载体的构建及外源基因的表达．蚕业科学，２００２，２８（４）：３０４～３０７［１９］ＬｕｃｋｏｗＶＡ，ＬｅｅＳＣ，ＢａｒｒｙＧＦ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｅｕｌｏｖｉｒｕｅｓｂｙｓｉｔｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ—ｍｅｄｉａｔｅｄｉｎｓｅｒｔｉｏｎｏｆｆｏｒｅｉｇｎｇｅｎｅｓｉｎｔｏｂａｅｕｌｏｖｉｒｕｓｇｅｎｏｍｅｐｒｏｐａｇａｔｅｄｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ．ＪＶｉｍｌ，１９９３，６７（８）：４５６６—４５７９［２０］王汉中，黄七，司艳红，等．一种新颖的棉铃虫单粒包埋核多角体病毒表达系统．中国病毒学，２００２，１７（４）：３１９—３２５［２１］洪华珠，彭建新．一株高水平表达重组蛋白昆虫细胞系的建立．昆虫学报，２００１，４４（３）：２７６～２８０【２２ＪＰｅｔｒｉｃｅｖｉｃｈＶＬ，ＰａｌｏｍａｒｅｓＬＡ，ＧａｎｚａｌｅｚＭ．ｅｔａ１．Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓｔｈａｔｄｅｔｅｒｍｉｎｅｖｉｒｅｓａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｋｉｎｅｔｉｃｓ：ｔｏｗａｒｄｔｈｅｄｅｓｉｇｎｏｆｂｅｔｔｅｒｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｔｈｅｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌ·ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．ＥｎｚｙｍｅＭｉｅｒｏｂＴｅｃｈ。２００１，２９（１）：５２～６１【２３ＪＳａｉｔｏＴ，ＯｏｊｉｍＴ，ＴｏｆｉｙａｍａＭ，ｅｔａ１．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｅｌｌｃｙｃｌｅＧＦＰｕｖｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．ＪＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００２，９３（２）：１２１～１２９［２４］ＯｌｅｊｎｉｋＡ，ＧｍｊｅｋＷ，ＭａｒｅｃｉｋＲ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｈｙｐｅｒｏｓｍｏｌａｒｉｔｙｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙｉｎｂａｅｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．ＪＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００３，１０２（３）：２９１—３００［２５］ＤｕｓｔｉｎＴ。ＩｓｅｌｉＡ，ＭｏｎｔｅｌｏｎｅＢＡ，ｅｔａ１．ＩｍｐｒｏｖｉｎｇｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＵＶｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ：ｉｎｃｒｅａｓｅｄｖｉｒｕｌｅｎｃｅｒｅｓｕｌｔｉｎｇｆｒｏｍ４４中ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＤＮＡＭｐａｉｒｅｎｚｙｍｅ．ＪＩｎｖｅｎｅｂ国生物工程杂志ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＫａｐｏｓｉ’ｓ第２４卷ｓａｒｃｏｍａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄＰａｔｈｏｌ，２００３，８２（１）：５０—５６ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅＪ，ＢｅｃｋｍａｎｂｙｔｈｅＫ，ｅｔａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｓｙｓｔｅｍ．ｕｓｉｎｇＢａｃｕｌｏｖｉｍｓｖｅｃｔｏｒｓｙｓｔｅｍ．［２６］ＡｋｋａｒｉＰＡ，ＮｏｗａｋＫａ＿ａｃｔｉｎＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒｅｓＰｕｒｉｆ，２００３，２９：４２—５０８ｋｅｌｅｔａｌＢｉｏｃｈｅｍｐｒｏｔｅｉｎｓｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［３１］ＡｋｋａｒｉＰＡ，ＮｏｗａｋＫＪ，ＢｅｃｋｍａｎＫ，ｅｔａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｓｙｓｔｅｍ．ＢｉｏｐｈＲｅｓＣｏ，２００３，３０７：７４—７９Ｐ，ｅｔａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｌｔｒｉｎｉｎｔｈｅａｎｄｐｕｒｉｔｙｓｋｅｌｅｔａｌａ—－ａｃｔｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓｂｙｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［２７］ＴｏｎｙＣＡ，ＰｈａｎＫＪ，ＮｏｗａｋｓｙｓｔｅｍａｎｄＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈＲｅｓＣｏ，２００３，３０７：７４—７９Ｄ，ＦｒａｓｅｒＭｉｎｆｅｃｔｅｄＪ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｂｅｔａｂａｃｕｌｏｖｉｍｓｉｔｓｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｈｉｓｈｙｉｅｌｄｂｙ［３２］ＳｍｉｔｈＧＥ，ＳｕｍｍｅｒｓＭｉｎｓｅｃｔｃｏｂａｌｔ（ＩＩ）ａｆｆｉｎｉｔｙ２９：２８４—２９０ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．ＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒｅｓｓＰｕｒｉｆ，２００３，ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｉｎｃｅｌｌｓｗｉｔｈｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ．ＭｏｌＣｅｌｌＢｉ０１。１９８３，３：２１５６～２１６５Ｓ，ＳｈｉｍｏｋａｗａＥ，ｅｔａ１．Ｈｉｉｓｈｏｆｌｅｖｅｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｕｓｉｎｇ［２８］ＮａｇａｔａａｎｄＴ，Ｉｓｈｉｋａｗａｐｕｒｉｆｉｃ８ｔｉｏｎ［３３］Ｇｈｏｓｈｃｅｌｌｓ，ＰａｒｖｅｚＭＫ，ＢａｎｅｒｊｅｅｆｏｒＫ，ｅｔａ１．Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｍａｍｍａｌｉａｎｓｔｒａｔｅｇｙ．ｂｉｃａｃｔｉｖｅｂｏｖｉｎｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１８ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ：ａｎｅｍｅｒｇｉｎｇｂａｃｕｌｏｖｉｒｏｓｓｙｓｔｅｍ．ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＩｍｍｕｎｏｌａｎｄＩｍｍｕｎｏｐａｔｈ，２００２，８７ＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｈｅｒ，２００２，６（１）：５～ｌｌＥ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｂｙｔｈｅｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓｏｆｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｌｉｎｅｓ（１—２）：６５—７２［３４］ＬｙｎｎＪｒｆｏｒＭＥ，ｅｔａ１．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＤ［２９］ＭｗａｎｇｉＳＭ，ＳｔａｂｅｌＴＪ，ＫｅｈｄｉｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍｔｙｐｅＩｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｃｃｌｕｓｉｏｎ—ｂｏｄｙｄｅｒｉｖｅｄｐｈｅｎｏｔｙｐｅｏｆｂａｃｕｌｏｖｉｍｓｓｏｌｕｂｌｅｐｏｒｃｉｎｅｔｕｍｏｒｐｏｒｃｉｎｅｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ．ＪＩｎｖｅｒｔｃｂＰａｔｈｏｌ，２００３，８３（３）：２１５—２２２ＹＣ，ｅｔａ１．ＧｅｎｅｒａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｐｅａｎｄｓｏｌｕｂｌｅｎｅｃｒｏｓｉｓＩｍｍｕｎｏｌ［３５］ＨｕＹＣ，ＴｓａｉｗｉｔｈＣＴ，ＣｈｕｎｇｏｆｃｈｉｍｅｒｉｃａｎｄｉｔｓＩ－ＩｇＧｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙａｎｄｂａｃｕｌｏｖｉｒｎｓｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｈｉｓｔｉｄｉｎｅ－ｔａｇｓｉｍｍｏｂｉｈｚｅｄｄｉｓｐｌａｙｅｄｍｅｔａｌｔｈｅｅｎｖｅｌｏｐｅＩｍｍｕｎｏｐａｔｈ，２００２，８６（３—４）：２５１—２５４ｕｓｉｎｇａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．［３０］ＤｏｒｊｓｕｒｅｎＤ，ＢａｄｒａｌｍａａＹ，ＭｉｋｏｖｉｔｓＪ，ｅｔａ１．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＥｎｚｙｍｅＭｉｃｒｏｂＴｅｃｈ，２００３，３３：４４５～４５２ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＩｎｓｅｃｔＢａｅｕｌｏｖｉｒｕｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＳｙｓｔｅｍＬＩＵＧａｏ．ｑｉａｎ９１（１ＺＨＡＮＧＫｅ．ｃｈａｎ９２ａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣｅｎｔｒａｌＷＡＮＧＸｉａｏ—ｌｉｎ９１ＷＥＩＭｅｉ—ｃａｉｌＣｏｆｉｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ２ＳｏｕｔｈＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｕｚｂｏｕ４１２００６，Ｃｈｉｎａ；ＳｃｈｏｏｌｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＹａｎｇｕｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４０３６，Ｃｈｉｎａ）ＡｂｓｔｒａｃｔｆｏｒｅｉｇｎｇｅｎｅｓｇｅｎｅＩｎｓｅｃｔｂａｃｕｌｏｖｉｍｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｗｈｉｃｈｈａｓｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｔｈｅｅｘｔｒｅｍｅｌｙｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｏａａｎｄｗｉｔｈｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｌｙｍｏｄｉｆｙｔｈｅｎｅｗｌｙｓｙｎｔｈｅｓｉｓｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｅｔｃ，ｉｓｂｅｉｎｇｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｌｙｕｓｅｄｉｎｔｈｏｕｓａｎｄｏｆｈｉ｝ｇｈ—ｖａｌｕｅｆｏｒｅｉｇｎｐｒｏｔｅｉｎｓｈａｖｅｂｅｅｎｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｐｒｏｄｕｃｅｄｉｎｔｈｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，ａｂｏｕｔｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｆｏｒａｃｑｕｉｒｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｉｒｕｓｎｏｗｉｓｕｓｕａｌｌｙ８０％－－．９０％ｗｈｉｌｅｉｔｗａｓａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙｖｅｃｔｏｒｓ０．１％一１％ｗｉｔｈｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｍｅｔｈｏｄｉｎｔｈｅｐａｓｔ，ａｎｄｓｏｍｅｈｏｓｔｒａｎｇｅｅｘｐａｎｄｅｄｉｎｓｅｃｔｂａｃｕｌｏｖｉｍｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｓｏｍｅｎｅｗｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｌｉｎｅｓａｐｐｅａｒｅｄ．Ｔｈｅｉｎｓｅｃｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ，ｉｎｔｈｅｎｅｗｃｅｎｔｕｒｙ，ｗｉｌｌｂｅａｐｐｌｉｅｄｉｎｄｒｕｇｒｅｓｅａｌ℃ｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｖａｃｃｉｎｅｓ，ｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙａｎｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅｓｏｍｅｓｔｉｌｌｐｒｏｂｌｅｍｓｓｈｏｕｌｄｔｏｂｅｒｅｓｏｌｖｅｄ，ｓｕｃｈａｓｔｈｅｄｉｆｆｉｃｕｌｔｉｅｓｉｎｐｕｒｉｆｙｉｎｇｐｒｏｄｕｃｔ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｏｏｆｍｕｈｉｇｅｎｅ，ａｎｄａｍｂｉｇｕｉｔｙｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｈｉｉｓｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｆｏｒｌａｔｅｇｅｎｅｄｕｅｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｓｏｆｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ，ｅｔｃ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＩｎｓｅｃｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍ万方数据 昆虫杆状病毒表达系统的研究与应用进展
作者：作者单位：
刘高强， 章克昌， 王晓玲， 魏美才
刘高强(中南林学院生命科技学院,株洲,412006;江南大学生物工程学院,无锡,214036)， 章克昌(江南大学生物工程学院,无锡,214036)， 王晓玲,魏美才(中南林学院生命科技学院,株洲,412006)
中国生物工程杂志CHINA BIOTECHNOLOGY2004,24(7)13次
刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
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